【摘 要】
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根据犬腺病毒纤突基因的核苷酸序列设计并合成了一对引物,以CAV-2弱毒疫苗株的DNA为模板,对纤突基因进行PCR扩增,PCR产物经纯化与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛
【机 构】
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成都军区联勤部军事医学研究所,云南,昆明,650032
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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根据犬腺病毒纤突基因的核苷酸序列设计并合成了一对引物,以CAV-2弱毒疫苗株的DNA为模板,对纤突基因进行PCR扩增,PCR产物经纯化与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒pTCAV-F,然后用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,回收1.8Kb的目的片段后与同样双酶切的真核表达载体pcDNA3连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选重组质粒pcCAV-F,并进行了序列测定.5只9月龄CAV抗体阴性的犬分别接种不同剂量的pcCAV-F及空质粒,8w接种一次,每次接种前采血,测定血清效价,在第三次接种4w后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7d及14d时采血,测定血清效价.接种pcCAV-F疫苗的犬攻毒后除一只发病外,其余不发病,而接种空质粒的对照犬则全部发病,说明所构建的核酸疫苗(pcCAV-F)能对犬产生较好的免疫保护.
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