【摘 要】
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本研究建立了可同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌的双重PCR快速检测技术.根据单增李斯特菌的hly基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因设计特异性引物.对双重PCR体系中的退
【机 构】
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大连理工大学生命科学与技术学院 辽宁大连116024
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十二届年会暨第八届中美食品业高层论坛
论文部分内容阅读
本研究建立了可同时检测单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌的双重PCR快速检测技术.根据单增李斯特菌的hly基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因设计特异性引物.对双重PCR体系中的退火温度、引物浓度、dNTPs添加量、MgCl2添加量、Taq DNA聚合酶添加量进行优化,对其灵敏度和特异性进行了验证.结果表明,双重PCR体系中(25μL),hly的引物浓度为0.2μmol/L,nuc的浓度为0.4μmol/L,dNTPs的添加量为2.5μL,MgCl2的添加量为3μL,Taq DNA聚合酶的添加量为0.3μL,DNA模板各1μL.反应程序为：95℃预变性3 min；94℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸30s,32个循环,72℃延伸10 min.同时检测两种致病菌的灵敏度可达到103cfu/mL.经特异性检测结果可知,所选择的单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的引物浓度其特异性较强,互相不发生干扰.最终建立了具有较高的准确性、可行性、实用性和发展性的双重PCR检测方法.
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