【摘 要】
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目的原核表达人肠激酶轻链突变体(hEKLm),以期提高肠激酶的稳定性及特异性,并应用于融合蛋白的切割与纯化。方法根据文献调研对人肠激酶轻链氨基酸序列进行改造并采用overlap
【机 构】
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郑州大学药学院,郑州大学新药研究开发中心,河南郑州 450001
【出 处】
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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周
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目的原核表达人肠激酶轻链突变体(hEKLm),以期提高肠激酶的稳定性及特异性,并应用于融合蛋白的切割与纯化。方法根据文献调研对人肠激酶轻链氨基酸序列进行改造并采用overlap PCR合成其对应DNA片段,将DsbC和6×His作为融合标签,在大肠杆菌中进行诱导表达。结果成功构建了原核表达质粒pET28b-DsbC-hEKLm,并将该质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)。经SDS-PAGE分析,重组蛋白以包涵体形式表达,重组蛋白经复性后显示具有催化活性。结论成功使用大肠杆菌表达了hEKLm,为其进一步在融合蛋白的切割和纯化方面的应用奠定了基础。
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