论文部分内容阅读
精子介导基因转移(SMGT)是目前转基因动物研究中简单而高效的方法之一,其中精子结合和内化外源基因的效率是精子介导转基因成功的关键。本文以DIG标记的线性化EGFP作为示踪基因来检测猪精子结合和内化外源基因的影响因素,结果表明:猪精子能够自发结合外源基因,结合部位主要在精子顶体后区。精子结合外源DNA的阳性率随共孵育时间延长而增加,在37℃或39℃时孵育60分钟后,阳性率不再增加;在17℃时孵育90分钟后,阳性率不再增加。在检查的15只公猪样本中,精子与外源DNA的结合率为6.57%-35.81%,内化率为2.99%-24.66%,个体间差异显著(p<0.01)。精浆能够强烈抑制外源基因的结合和内化,脂质体及DMSO能够显著提高转染效率。死精子能够结合外源基因,但不能将其内化;反复冻融导致质膜破裂的精子对外源基因有更高的结合率,且不受个体影响。