【摘 要】
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琼胶酶作为能够水解琼胶多糖的糖苷水解酶,是目前海洋微生物酶类研究的一个热点.本研究以前期所筛选并测序的海洋细菌Aquimarina agarilytica ZC1为基础,研究其中属于GH5
【机 构】
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汕头大学生物系 广东汕头515063
【出 处】
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广东省遗传学会第九届代表大会暨学术研讨会
论文部分内容阅读
琼胶酶作为能够水解琼胶多糖的糖苷水解酶,是目前海洋微生物酶类研究的一个热点.本研究以前期所筛选并测序的海洋细菌Aquimarina agarilytica ZC1为基础,研究其中属于GH50糖苷水解酶家族的琼胶酶.通过克隆表达得到重组琼胶酶573、575及576.对重组琼胶酶酶学性质进行研究：重组酶575在温度为37℃、pH为8.0时酶活力最高,同时该酶在温度小于40℃以及pH在5.0～10.0之间表现稳定.Ca2+对575酶活性有很强的促进作用,在浓度为50mM的条件下琼胶酶575的活力提高了136％；A13+以及EDTA-Na2、SDS会抑制琼胶酶575的活性.其降解琼脂糖的Vmax和Km值分别为8.27×10-5mol.L-1.min-1和0.0133mol.L-1.重组酶576在温度为37℃、pH为6.0时酶活力最高；尿素、EDTA-Na2和金属离子Na+、K+、Fe3+对重组酶576活性几乎没有影响；SDS和金属离子Mg2+、Ca2+、A13+严重抑制重组酶576的活性；其降解琼脂糖的Vmax和Km值分别为6.22× 10-5mol.L-1.min-1,Km值为0.0132mol.L-1.同时采用13C-NMR对重组琼胶酶降解琼脂糖终产物进行进一步的分析,图谱显示位于97ppm与93ppm处存在响应峰,而90.7ppm处无共振响应,由此确定重组酶为β-琼胶酶.通过TLC对重组酶575和576降解琼脂糖和新琼寡糖产物进行分析,其终产物是新琼二糖.最终我们得出结论：重组酶575和576均属于GH50家族,为外切型的β-琼胶酶,二者降解琼脂糖和新琼寡糖的唯一产物均是新琼二糖,这在国际上鲜有报道.
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