【摘 要】
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目的: 筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidumsuis)单克隆抗体(McAb)，并探讨其生物学活性。方法:将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠，取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选，有限稀释法进行克隆;用间接ELISA叠加试验.间接免疫荧光试验鉴定McAbs的免疫反应活性。结果:获得3株能稳定分泌抗猪隐孢子虫McA
【机 构】
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河南省动物疫病预防控制中心 郑州河南 450008 河南农业大学牧医工程学院 郑州河南 450002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会
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目的: 筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidumsuis)单克隆抗体(McAb)，并探讨其生物学活性。方法:将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠，取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选，有限稀释法进行克隆;用间接ELISA叠加试验.间接免疫荧光试验鉴定McAbs的免疫反应活性。结果:获得3株能稳定分泌抗猪隐孢子虫McAbs的杂交瘤细胞林，命名为1E1C5、1E11A5，287A1，分别属于IgM、IgG3和IgG2a类;其细胞培养上清效价分别为1：3200、1：1600和1：3200，小鼠腹水效价分别为1：1.6×105、1：1.6×105和1：0.8×105;ELISA叠加试验表明3株单抗可识别两个不同抗原位点，lElC5有较高的亲和力;免疫荧光试验结果显示3株单抗均能与猪隐孢子虫卵囊壁反应，但与艾美耳球虫、人隐孢子虫(C.hominis)有微弱的交叉反应。结论:获得了3株可识别猪隐孢子虫卵囊壁的McAbs，为进一步开展猪隐孢子虫快速诊断研究奠定了基础。
其他文献
目的: 建立快速检测致病性猪链球菌种及1、2、7型的多重PCR方法，并进行初步的临床应用。方法:根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及1(14)，2(1/2)、7型型特异的cps1I、cps2H、cps7H基因序列，分别设计了4对引物，预计扩增的目的基因片段分别为689bp、441bp、542bp和232bp。通过对单个基因PCR和多重PCR扩增条件.反应体系进行优化，建立了快速检测猪链球菌种及其1
本研究利用温度敏感型穿梭自杀质粒pSET4s，定点敲除猪链球菌2型野生型强毒株ZY458的lin基因，构建基因缺失突变菌株458△lin，利用家兔感染模型对ZY458及其突变菌株的生物学特性进行比较研究。家兔感染实验表明，接种ZY458菌株的家兔体重下降，出现明显的临床症状，5只家兔4d内全部死亡，而458△lin感染组家免生长正常，未出现任何明显临床症状。研究结果显示Iin是猪链球菌2型新发现的
2型猪链球菌(streptococcus suis，S.suis)是一种全球流行的人畜共患病病原体，能够导致猪和人的脑膜炎、败血病、关节炎及突发性死亡等，给人的生命和财产构成极大威胁。目前对2型猪链球菌(Streptococcus suis type2，SS2)的研究还不能清楚的解释其致病机理，并且缺少有效的诊断和疫苗靶住，促使2型猪链球菌病的预防，诊断和治疗存在一定的困难。本研究以2型链球菌的无
构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增△srtC5片段，该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列，但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自杀载体pSET4s∶∶△srtC5，并将其电转化导入ZY458菌株，通过同源重组获得△srtC5突变体。通过体外的细胞黏附实
目的: 克隆表达猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶。方法: 设计1时引物，采用PCR方法以猪链球菌2型河南分离株PDSWG-1的基因组DNA为模板扩增出gdh全基因序列。用限制性核酸内切酶BamH I.Xhol进行双酶切后，将其定向克隆到pET32a(+)中，构建重组表达质粒pET32a-gdh，并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达。结果: 经1mmol/L IPTG诱导后SDS-
目的: 克隆表达猪链球菌9型英膜多糖部分抗原表位。方法: 设计1对引物，采用PCR方法以猪链球菌9型河南分离株PY-2的基因组DNA为模板扩增出cps9G全基因序列。用限制性核酸内切酶BamHI、Xhol进行双酶切后，将其定向克隆到pET32a(+)中，构建重组表达质粒pET32a-cps9G，并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达，并优化表达条件。结果: 经1.2mmol
应用纸片琼脂扩散法分析了108株猪源链球菌临床流行菌株对13种临床常用药物的耐药性，结果表明：绝大部分菌株对头孢三嗪、氨苄西林、青霉素、万古霉素、新生霉素高度敏感;对阿米卡星、氧氟沙星、环丙沙星中度敏感;对红霉素、四环素、林可霉素，克林霉素链霉素耐药。多数菌株表现为多重耐药，三重，四重和十重耐药的猪源链球菌各有6株，各占分离株的5.6％(6/108)：五重和九重耐药的猪源链球菌各有16株，各占分离
2007年12月，某大型规模化猪场300余头30～70日龄仔猪爆发疑似副猪嗜血杆菌病。经鉴定，最终从21头猪的多部位分离到41株副猪嗜血杆菌。血清型鉴定结果显示，血清5型18株(43.9％)，血清14型12株(29.3％)、血清4型1株，未定型10株(24.4％)。同一头猪身上也存在2种血清型同时感染。对21株临床分离株的ompA全基因和16S rRNA片段进行了序列分析。发现ompA基因完整的编
收集2009年临床疑似副猪嗜血杆菌(HPS)感染病死猪肺脏淋巴结等组织样品共20份，经形态镜检、染色特性及培养。初步鉴定为HPS感染。在细菌学分禽鉴定基础上，进一步采用河南省动物疫病控制中心技术研发室提供的HPS nest-PCR检测方法进行检测，并对确诊的细菌株进行了药物敏感实验。结果表明：20份疑似副猪嗜血杆菌(HPS)感染样品中有12份为PCR检测阳性，表明副猪嗜血杆菌为发病猪的主要致病病原
@@副猪嗜血杆菌病己成为严重危害全球养猪业的一种重要细菌病。目前对该病原的研究特别是其致病与免疫机理的研究尚处于起步阶段。进行副猪嗜血杆菌致病与免疫机理的研究，对于该病的预防、诊断和控制具有重要意义。本研究以副猪嗜血杆菌SC-1四川分离株为材料，构建其基因组表达文库，并对该菌的体内诱导抗原基因进行筛选，并进一步对已筛选的副猪嗜血杆菌荚膜多糖输出蛋白基因进行免疫原性的研究。