【摘 要】
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目的: 克隆表达猪链球菌9型英膜多糖部分抗原表位。方法: 设计1对引物，采用PCR方法以猪链球菌9型河南分离株PY-2的基因组DNA为模板扩增出cps9G全基因序列。用限制性核酸内切酶BamHI、Xhol进行双酶切后，将其定向克隆到pET32a(+)中，构建重组表达质粒pET32a-cps9G，并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达，并优化表达条件。结果: 经1.2mmol
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院，河南郑州，450002 郑州牧业高等专科学校，河南郑州，450002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会
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目的: 克隆表达猪链球菌9型英膜多糖部分抗原表位。方法: 设计1对引物，采用PCR方法以猪链球菌9型河南分离株PY-2的基因组DNA为模板扩增出cps9G全基因序列。用限制性核酸内切酶BamHI、Xhol进行双酶切后，将其定向克隆到pET32a(+)中，构建重组表达质粒pET32a-cps9G，并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达，并优化表达条件。结果: 经1.2mmol/L IPTG诱导4h后SDS-PAGE分析表明，重组菌株表达出了约50.7KDa的融合蛋白条带，与预期一致。Westernblotting分析表明，该融合蛋白具有特异的生物学活性。结论: 这为以后建立快速简便特异的免疫学检测方法及制备单克隆抗体提供了较好的抗原，同时为研制猪链球菌亚单位疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。
其他文献
应用PCR方法，从郑州、福建、浙江金华和宁波猪肺脏中分别扩增出四段PCMV gB基因，并将其分别克隆入pMD18-T载体，经蓝白斑筛选和PCR鉴定，将阳性克隆进行序列分析并构建系统进化树。序列分析表明，其gB基因全长为2580bp,编码860个氨基酸，与PCMV其他序列相比，其同源性在96.1％～99.7％，与β疱疹病毒亚科中其他常见毒株同源性在25.9％-38.1％;推导的氨基酸序列，有11个半
@@口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒(又称蓝耳病)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒和猪的伪狂犬病毒是威胁养猪业最严重的病毒性疾病病原体。近几年，猪的病毒性疾病在全国范围内流行严重，给我国的养猪业生产造成了巨大的损失，其病原体检测和抗体监测是各级动物疾病预防机构最重要的工作。
为更好了解河南省猪场猪链球菌2型的感染情况，应用猪链球菌血清2型抗原，采用平板凝集法测定1609份来自河南省17个地市87家猪场的血清样品。结果显示，河南省各地区猪链球菌2型血清抗体猪场阳性率为83.33％-100％，阳性猪场数占被检猪场总数的95.40％(83/87);抗体阳性猪群中个体阳性率为2.5～100％，阳性率≥50％的猪场数占检出阳性场总数的81.93％(68/83).所有被检样品的平
目的: 对河南省发病猪群猪链球菌的感染流行情况及血清型分布进行调查。方法: 根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及1(14)、2(1/2)、7、9型型特异的cps1I、cps2H、cps7H、cps9G基因序列，分别设计了5对特异性引物，对河南省14个地市33个猪场送检的83份发病猪扁桃体样品进行PCR检测，欲扩增目的基因片段分别为689bp、441bp、542bp、232bp和330bp。并对部分
目的：分离猪链球菌菌株，并对其进行初步的鉴定，以提供实验材料，供以后进一步深入细致的研究。方法:从临床发病猪的扁桃体中分离疑似猪链球菌，进行形态学.染色特性鉴定、并将疑似菌株用猪链球菌种及其主要致病血清型PCR方法进行鉴定，再抽取部分菌株PCR产物进行序列测定进行验证。结果:分离到的猪链球菌均为针尖状大小，灰白色或灰色，α、β.γ，溶血的小菌落、革兰氏染色均为阳性球菌，一般成对或短链状，偶有长链。
目的: 建立快速检测致病性猪链球菌种及1、2、7型的多重PCR方法，并进行初步的临床应用。方法:根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及1(14)，2(1/2)、7型型特异的cps1I、cps2H、cps7H基因序列，分别设计了4对引物，预计扩增的目的基因片段分别为689bp、441bp、542bp和232bp。通过对单个基因PCR和多重PCR扩增条件.反应体系进行优化，建立了快速检测猪链球菌种及其1
本研究利用温度敏感型穿梭自杀质粒pSET4s，定点敲除猪链球菌2型野生型强毒株ZY458的lin基因，构建基因缺失突变菌株458△lin，利用家兔感染模型对ZY458及其突变菌株的生物学特性进行比较研究。家兔感染实验表明，接种ZY458菌株的家兔体重下降，出现明显的临床症状，5只家兔4d内全部死亡，而458△lin感染组家免生长正常，未出现任何明显临床症状。研究结果显示Iin是猪链球菌2型新发现的
2型猪链球菌(streptococcus suis，S.suis)是一种全球流行的人畜共患病病原体，能够导致猪和人的脑膜炎、败血病、关节炎及突发性死亡等，给人的生命和财产构成极大威胁。目前对2型猪链球菌(Streptococcus suis type2，SS2)的研究还不能清楚的解释其致病机理，并且缺少有效的诊断和疫苗靶住，促使2型猪链球菌病的预防，诊断和治疗存在一定的困难。本研究以2型链球菌的无
构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增△srtC5片段，该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列，但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自杀载体pSET4s∶∶△srtC5，并将其电转化导入ZY458菌株，通过同源重组获得△srtC5突变体。通过体外的细胞黏附实
目的: 克隆表达猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶。方法: 设计1时引物，采用PCR方法以猪链球菌2型河南分离株PDSWG-1的基因组DNA为模板扩增出gdh全基因序列。用限制性核酸内切酶BamH I.Xhol进行双酶切后，将其定向克隆到pET32a(+)中，构建重组表达质粒pET32a-gdh，并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达。结果: 经1mmol/L IPTG诱导后SDS-