【摘 要】
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目的：根据骨髓间充质干细胞(BMSCs)的粘附特性,应用全骨髓贴壁培养法,建立一个简便、有效的原代培养增殖和纯化BMSCs的方法,观察大鼠BMSCs的生物学特性及其成脂分化潜能,
【机 构】
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首都医科大学卫生管理与教育学院,北京市,100069
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目的：根据骨髓间充质干细胞(BMSCs)的粘附特性,应用全骨髓贴壁培养法,建立一个简便、有效的原代培养增殖和纯化BMSCs的方法,观察大鼠BMSCs的生物学特性及其成脂分化潜能,为BMSCs移植、再生、抗纤维化治疗研究提供丰富的种子细胞来源.方法：1.取Wistar大鼠股骨、胫骨内骨髓制成单细胞悬液在培养皿中培养,每24小时～48小时换液,细胞融合面积＞80％的时候,对细胞进行1∶2传代培养.2.按两种不同的培养条件对BMSCs进行分组培养,根据血清和培养基的不同分为4个组：①α-MEM培养基+14％血清；②α-MEM培养基+10％血清；③DMEM培养基+14％血清；④DMEM培养基+10％血清,分别在第1、2、3天进行细胞形态的观察及计数,并将细胞计数结果作统计分析.3.进行BMSCs体外成脂诱导分化,21天后观察BMSCs的形态学及成脂诱导分化的鉴定.结果：1.在接种8小时后即可观察到有少量梭形、三角形和多角形细胞贴壁,24小时后可观察到细胞间生成联系.镜下观察细胞呈梭形,胞质丰富,核仁清晰,可见较多的分裂相细胞,并且细胞形态均一、呈漩涡样聚集生长.2.在成脂细胞诱导分化的实验中,1周后镜下可观察到小脂滴,21天后油红O染色可见脂肪细胞呈红色.3.按照不同培养条件分组的细胞第一天和第二天四种培养条件下的细胞数无统计学差异P＞ 0.05,第三天不同培养基分组的细胞数有统计学差异P＜0.05,不同血清浓度分组的细胞数无统计学差异P＞ 0.05.且两种因素交互作用对细胞增殖数目无统计学意义P＞ 0.05.结论：1.成功应用全骨髓贴壁培养法建立了BMSCs的原代培养增殖和纯化方法.2.通过观察所培养细胞的形态并对其进行成脂细胞诱导分化,成功鉴定所获细胞即为BMSCs.3.在本实验室长时间培养(≥3天)α-MEM培养基优于DMEM培养基,在10％ ～ 14％的血清浓度对细胞增值数目无明显影响,尚不能认为两种不同的培养基和两种不同血清浓度的交互作用对细胞增殖数目有影响.
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