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遗传变异是生物进化的基础,自然环境下,植物自身发生的遗传变异率很低,通过理化因素诱导基因突变能进一步扩宽种质资源,增加植物遗传多样性。EMS(甲基磺酸乙酯)作为化学诱变剂在研究中应用广泛,诱变效果较明显、作用稳定。其诱变不需要遗传转化,可使DNA分子产生较宽的突变谱,因而被广泛用于突变体的创造。本实验室前期利用EMS诱变加工番茄,获得大量突变体后,在不同浓度盐胁迫下,通过形态观察和生理指标的检测,从中筛选出17株耐盐突变体作为进一步在分子机制方面研究的基础。本研究通过RNA-Sep技术对EMS处理后加工番茄耐盐突变体和未经EMS处理的幼苗叶片进行转录组测序,筛选耐盐突变体与正常植株的差异表达基因,鉴定叶片响应盐胁迫应答基因及表达特性,以期更好地理解加工番茄对盐胁迫响应的分子机制,为进~步鉴定和克隆其重要的耐盐基因,提高加工番茄耐盐性状奠定基础,进而改良加工番茄品种。经EMS诱变处理加工番茄‘JW9’获得17株耐盐突变植株,单独收种后,于穴盘培育至幼苗采样,液氮速冻,于-70℃保存。提取样品总RNA进行转录组cDNA文库和数字表达谱cDNA文库的制备,然后进行IlluminaHiSeq/MiSeq测序,分析测序结果,确定不同样品与对照间基因的表达差异,并通过实时荧光PCR验证测序结果的准确性以及差异基因在不同样品的表达情况。对转录组测序结果进行分析,共获得了102 Gb大约810 974 186个高质量的Clean Reads,cuffiinks软件重构转录本后得到38 l 90个已知转录本,l 647个未知转录本,对novel转录本序列,采用blastx程序,比对NR数据库,结果显示有327个基因得到注释,1 320个未得到注释,对于两样本有182个基因的表达量差异达到2倍以上,其中88个表达量上调,94个表达量下调,这些差异表达基因功能主要涉及次生代谢、代谢途径、激素代谢及信号转导和植物病原菌互作等。经RT-qPCR分析表明,10个随机选择的基因在胁迫前后的表达特点与表达谱测序结果一致。