【摘 要】
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为建立Real-time PCR方法检测鳜鱼T细胞受体α链(TCRα)转录水平,根据GeneBank 上鳜鱼TCRα基因序列设计并合成特异性引物,以鳜鱼β-actin基因作为内参,采用RT-PCR方法从
【机 构】
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中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东广州510380
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为建立Real-time PCR方法检测鳜鱼T细胞受体α链(TCRα)转录水平,根据GeneBank 上鳜鱼TCRα基因序列设计并合成特异性引物,以鳜鱼β-actin基因作为内参,采用RT-PCR方法从鳜鱼的胸腺总RNA中扩增得到鳜鱼TCRa和β-actin基因,将目的片段纯化后克隆到PMD18-T载体上,测序鉴定.以阳性质粒为标准品,采用SYBR Green Ⅱ染料法进行实时荧光定量PCR扩增,构建标准曲线并进行溶解曲线分析.结果表明鳜鱼TCRα基因的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×108拷贝/μL范围呈良好的线性关系,r2达0.99以上,溶解曲线分析表明产物为特异的单峰.建立鳜鱼TCRα实时荧光定量PCR检测方法,为在mRNA水平对鳜鱼TCRa的定量分析奠定了基础.
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