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目的:探讨SIS(small intestinal submucosa,小肠粘膜下层)作为膀胱壁替代物用于兔膀胱扩大模型中促进膀胱组织再生的功能学及组织学特征.
方法:18只雄性新西兰大白兔(体重2.5-3.5kg).实验动物分为三组(A组,4周;B组,12周;C组,24周)每组6只.首先,对所有实验动物进行充盈期膀胱测压,并记录膀胱容量和DLPP(detrusor leak point pressure,逼尿肌漏尿点压力).然后,对所有实验动物进行膀胱扩大模型制作.腹侧切开膀肌,将小肠粘膜下层补片(1×2cm)用5/0可吸收线间断缝合的方法缝补扩大膀胱,并确保缝补后膀胱密闭性.三组试验动物分别在术后4、12、24周再次接受充盈期膀胱测压.检查后处死实验动物,取出膀胱及膀胱周围脂肪.一方而进行组织形态学观察.肉眼观察新生组织与正常组织(自身对照)区别.并进行HE染色和平滑肌肌动蛋自a-actin免疫组化试验比较新生组织和正常组织的区别.另一方面进行功能学检查.制作逼尿肌肌条(10×3×3mm)进行体外逼尿肌肌条试验,比较再生与正常肌条(自身对照)的收缩性.收集术前(自身对照)与术后充盈期膀胱测压数据,并进行比较.
结果:组织学上,C组(24周)中再生膀胱组织可见与正常膀胱组织相似的三层结构即粘膜层(包括粘膜下层)、肌层、浆膜层.A组(4周)中补片未完全降解,但其外表面已被再生组织覆盖.补片内表面有白色结石形成.
免疫组化可见平滑肌肌动蛋自a-actin在三组新生组织中均有不同程度的表达,且OD值随术后时间增加而逐渐增加.C组(24周)新生组织OD值与正常组织相比无显著差异(p>0.05).
体外逼尿肌肌条试验,C组(24周),再生肌条的自发性收缩频率(4.35±1.25min-1)和幅度(0.5±0.258)与正常肌条(频率:3.64±0.98min-1;幅度:0.69±0.09g)相比无显著差异(P>0.05). B组(12周),再生肌条的自发性收缩频率(2.88±0.49min-1)和幅度(0.13±0.014g)与正常肌条(频率:4.8±1.2min-1;幅度:0.47±0.083g)相比,数值减小,且有统计学意义(P<0.05).A组(4周)记录到新生肌条出现细小的颤动波,无法测出其频率与幅度,因此无法进行统计学比较.充盈期膀胱测压显示所有实验动物术后逼尿肌漏尿点压力与术前相比均有所降低,但无统计学意义.C组(24周)与术前相比,术后膀胱容量的增加有统计学意义.
结论:(1)膀胱扩大术后24周,借助小肠粘膜下层补片,兔膀胱逼尿肌可以再生并具有与正常逼尿肌相似的功能.(2)膀胱扩大24周后,再生的膀胱有较大的容量和较低的逼尿肌漏尿点压力(DLPP).(3)小肠粘膜下层可以替代肠道用于泌尿系统功能重建,但是还存在种种未解之题,如膀胱再生的完整机制,外源性生长因子水平维持,补片的面积与再生结果的关系,神经的功能性再生等等有待进一步研究.