论文部分内容阅读
目的 探讨VEGF 对ICH 后血肿周围脑水肿的作用及其是否与调节AQP4 的表达有关.方法 通过自体血5 μl 注入尾状核建立ICH 模型,于侧脑室注入重组人VEGF165(recombinant human VEGF165,rhVEGF165),用免疫荧光和Western blot 法观察给药1 d,3d,7 d 后血肿周围AQP4 蛋白表达变化.并分别用干湿重法、脑比重法、伊文思蓝(Evan’s blue,EB) 法、尼氏染色法及神经功能缺损评分在ICH 后上述时间点观察Evan’s blue,rhVEGF165对野生型(AQP4+/+) 及AQP4 基因敲除(AQP4-/-) 小鼠ICH后脑含水量、脑比重、血脑屏障(blood-brain barrier,BBB) 通透性、神经细胞坏死及神经功能的影响.并在离体培养的星形胶质细胞中加入rhVEGF165,观察6 h,12 h,24 h,48 h,72 h 后AQP4 蛋白及磷酸化C-Jun 氨基末端激酶(C-Jun amino-terminal kinase,JNK)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38-丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase,MAPK)、磷脂酰肌醇-3 激酶(phosphatidylinositol3’-kinase,PI3K) 的表达变化.同时观察上述通路抑制剂是否影响rhVEGF165 对AQP4 表达的调节.结果 侧脑室注入rhVEGF165 在给药后1 d,3 d,7 d 均可显著增加正常纹状体及ICH 后血肿周围AQP4 蛋白表达.干湿重法及脑比重法均提示:ICH 后侧脑室注入rhVEGF165 可减轻给药1 d,3d,7 d 后AQP4+/+ 小鼠血肿周围脑水肿,但对AQP4-/-小鼠血肿周围脑水肿无影响.rhVEGF165 不增加ICH 后AQP4+/+小鼠血肿周围EB 渗漏,但可显著增加AQP4-/-小鼠血肿周围EB 渗漏.侧脑室注射rhVEGF165 在ICH 后上述时间点对两组小鼠均可发挥减轻神经功能缺损及血肿周围神经细胞坏死的作用,且rhVEGF165 降低ICH 后AQP4+/+ 小鼠神经功能缺损评分及坏死神经细胞数量的百分比显著高于AQP4-/-小鼠.离体培养的星形胶质细胞中加入rhVEGF165 后12 h 即可使p-JNK 及p-ERK 表达增加,24 h 后可使AQP4 蛋白表达显著增加,上述蛋白表达均于48 h 达到高峰.rhVEGF165 上调星形胶质细胞AQP4 蛋白表达的效应可被JNK 及ERK 抑制剂,而非p38-MAPK 或PI3K 抑制剂所阻断.结论 VEGF 可通过激活JNK 及ERK 通路,上调AQP4 的表达,减轻ICH 后血肿周围脑水肿,进而发挥减轻血肿周围神经细胞坏死及神经功能缺损的作用,但不影响BBB 通透性.该结果可能为ICH 后脑水肿的治疗提供新的作用靶点.