【摘 要】
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目的 制备抗中枢神经系统(CNS)髓鞘源性分子-少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(Oligodendrocyte Myelin Glycoprotein,OMgp)的多克隆抗体,以检测OMgp在脊髓损伤(SCI)前后的表达变
【机 构】
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上海交通大学医学院神经生物学实验室,上海200025
【出 处】
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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议(The 7th Biennial Meeting and the
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目的 制备抗中枢神经系统(CNS)髓鞘源性分子-少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(Oligodendrocyte Myelin Glycoprotein,OMgp)的多克隆抗体,以检测OMgp在脊髓损伤(SCI)前后的表达变化和相关功能研究.方法 采用原核表达系统表达来源于大鼠的6*HIS-OMgp融合蛋白,经纯化后免疫新西兰兔制备多克隆抗体;采用免疫印迹,免疫组织化学和细胞培养技术对该抗体的特异性及生物学活性进行鉴定;采用纽约大学重物坠落仪制造大鼠脊髓损伤模型,重物坠落高度为12.5 mm;利用Western-blot的方法检测正常大鼠,假手术组(只打开锥板不损伤脊髓)及SCI后不同时间点(4 h,1d,3d,7d,14d,28 d)相同节段脊髓组织中OMgp的表达变化.结果 获得了高效价的1∶1 000 000兔抗大鼠OMgp多克隆抗体,该抗体能够识别原核表达的OMgp分子;大鼠脊髓切片的免疫组织化学结果显示,OMgp分子在神经元和少突胶质细胞中有广泛的表达,在星型胶质和小胶质细胞上不表达;大鼠SCI后不同时间点脊髓切片的免疫组织化学染色表明,在SCI后,OMgp同样只表达于神经元和少突胶质细胞表面,与损伤前相比表达有所上调,而在星型胶质和小胶质细胞上同样不表达;经Western-blot对不同损伤时间点损伤区域OMgp的表达变化进行统计学分析,发现从损伤后1d起OMgp呈现表达上调趋势,28 d时表达最高,其表达变化具有统计学意义(P<0.05).结论 制备了能识别天然OMgp分子,并具有良好生物学活性的抗OMgp多克隆抗体,为检测OMgp分子的表达和进一步的功能研究提供了有利工具;OMgp在SCI后呈现表达上调趋势,而其细胞学定位与SCI前相同,只分布于CNS的神经元和少突胶质细胞表面,在星型胶质和小胶质细胞上不表达.
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