鸡α干扰素基因的克隆表达与禽流感病毒(H5N1)的作用

来源 :中国畜牧兽医学会2006学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wzh309420
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构建了惠阳胡须鸡IFN-α/pGEXT-6P-1的重组质粒,并在BL21中实现高效表达,利用glutathione sepharose 4B亲和层析柱对重组蛋白进行了纯化.重组ChIFN-α的抗病毒活性为3.16×106 U/mg.试验表明,纯化的重组蛋白在细胞水平和鸡胚水平上都表现出很高的抗禽流感病毒活性,当ChIFN-α分别达到100U与5000U时,对病毒繁殖的抑制率都可达到100%.
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将本实验室分离保存的NA-1株鹅副黏病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA.参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段,并将各目的基因片段回收纯化,克隆PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切鉴定并进行序列测定,对测定结果进行拼接得到全长cDNA序列(
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