【摘 要】
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目的：运用新建立的基于Microtox技术(in vitro)的中药综合毒性评价技术及小鼠急性毒性试验(in vivo)对比研究苍耳子不同炮制品水提取物毒性,探究Microtox技术用于苍耳子提取物毒性快速评价的可行性.方法：1、建立费氏弧菌Microtox技术应用于中药综合毒性测试的反应体系.2、苍耳子水提取物分别应用Microtox技术进行生物综合毒性评价,得出相应发光细菌半数抑制浓度(IC5
【机 构】
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西南医科大学,泸州,646000;四川省中医药科学院·国家中医药管理局中药质量生物评价重点研究室·四川省道地药材系统开发技术研究中心·中药品质评价与创新中药研究四川省重点实验室,成都,610041
【出 处】
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世界中医药学会联合会中药新药创制专业委员会成立大会暨第一届学术年会
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目的：运用新建立的基于Microtox技术(in vitro)的中药综合毒性评价技术及小鼠急性毒性试验(in vivo)对比研究苍耳子不同炮制品水提取物毒性,探究Microtox技术用于苍耳子提取物毒性快速评价的可行性.方法：1、建立费氏弧菌Microtox技术应用于中药综合毒性测试的反应体系.2、苍耳子水提取物分别应用Microtox技术进行生物综合毒性评价,得出相应发光细菌半数抑制浓度(IC50)；采用小鼠急性毒性试验,得出相应的半数致死量(LD50),将两种毒性评价方法的评价结果进行比较.结果：1、费氏弧菌Microtox技术最优检测体系为：①最优发光条件：费氏弧菌冻干粉平衡15min后加入复苏液lml,混匀10min,取100μl菌液测试初始发光度,随后立即加入lml复苏液或待测样品,反应10min后再次测试相应发光强度,上述操作均在15℃±l℃条件下完成.②复苏稀释液、渗透压调节液及七水硫酸锌储备液不干扰费氏弧菌发光强度的测定,本方法特异性良好.③质控样品、定量下限样品批内精密度＜5％、批间精密度＜10％,准确度在87.81％-101.43％范围内.七水硫酸锌溶液在5mg/L-100mg/L范围内标准曲线方程为y=21.791 ln(x)-20.788,R2=0.9981,本方法下ZnSO4·7H2O对费氏弧菌的IC50为25.75mg/L.④对ZnSO4·7H2O储备液及其质控样品分别连续考察120h和8h,其RSD％均＜2％,提示其在室温及4℃保存条件下稳定性良好.2、苍耳子(生品)水提取物、苍耳子(炒黄)水提取物、苍耳子(炒焦)水提取物的发光细菌半数抑制浓度(IC50)分别为生药0.0432g/ml,0.0575g/ml,0.0308g/ml,即基于Microtox技术的综合毒性相对大小为：炒焦水提取物＞生品水提取物＞炒黄水提取物；苍耳子(生品)水提取物、苍耳子(炒黄)水提取物、苍耳子(炒焦)水提取物小鼠灌胃给药的半数致死量(LD50)分别为生药223.98g/kg,311.86g/kg,206.83g/kg,即基于小鼠急性毒性试验的毒性相对大小为：炒焦水提取物＞生品水提取物＞炒黄水提取物.进一步的相关性分析表明两种毒性检测方法评价结果总体趋势具有一致性.结论：1、针对费氏弧菌CS234这一菌株建立的测试体系具有良好的特异性、稳定性、灵敏度、准确度及适应性,提示可应用于中药综合急性毒性的测试.2、基于Microtox技术的生物综合毒性评价能够较好地表征苍耳子不同炮制品的毒性差异,且苍耳子水提取物采用基于Microtox技术的综合毒性检测结果与小鼠急性毒性试验的评价结果具有一定一致性,提示将Microtox技术用于苍耳子提取物毒性的快速评价具有一定的可行性,但两种毒性评价方法的相关程度还有待扩大样本量进一步研究.
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