基于末端保护和荧光探针检测生物素的传感器研究

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荧光方法由于灵敏度高,重现性好等优点而受到人们的广泛关注。生物素是人体生长发育必须物质,孕妇缺乏生物素,可导致生殖缺陷[1]。核酸外切酶Ι(ExoΙ)能够催化单链DNA水解,通过生物素与链霉亲和素特异性识别的原理[2],利用一种新型荧光苯乙烯基探针E36[3]荧光性质的变化,构建了一种检测生物素的荧光生物传感器。如图1所示,荧光探针E36和单链DNA结合,复合物显示较好的荧光信号。不存在游离生物素时,链霉亲和素和生物素修饰的DNA(biotinylated DNA)特异性结合,阻断核酸外切酶Ι(ExoΙ)的水解,加入荧光探针E36,单链DNA和E36结合后体系的荧光很强;存在游离生物素时,游离生物素和生物素修饰的DNA(biotinylated DNA)共同竞争链霉亲和素的结合位点,没有被链霉亲和素保护的DNA被ExoΙ水解,从而单链DNA含量减少。加入荧光探针E36后,由于体系中单链DNA含量减少,单链DNA和E36结合后体系的荧光减弱。荧光减弱程度与目标物浓度在70.0pM-400.0nM呈良好的线性关系,检测限低至0.03nM.
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