【摘 要】
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[目的]通过指数式扩增配体的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选出能够特异性识别磺胺二甲基嘧啶(sulfamethazine,SM2
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,北京100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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[目的]通过指数式扩增配体的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选出能够特异性识别磺胺二甲基嘧啶(sulfamethazine,SM2)的核酸适配体,并建立基于该核酸适配体的化学发光分析方法用于牛奶中SM2的检测.[方法]分别将SM2和磺胺甲基嘧啶(sulfamerazine,SMR)与磁珠(Magnetic beads,MBs)偶联,并以SMR-MBs作为反筛工具,建立了磁珠辅助-指数式扩增配体的系统进化(Mag-SELEX)筛选体系.采用平衡超滤法测定筛选得到的核酸适配体的解离常数(Kd),并通过竞争法测定亲和力较高的核酸适配体的特异性.将亲和力高、特异性好的核酸适配体用于检测方法的建立.以生物素化的核酸适配体为识别工具,使用混合酸酐法合成辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记半抗原SM2-GA-HRP,利用链霉亲和素-生物素系统建立了用于检测SM2的直接竞争化学发光分析方法.牛奶样本离心取上清稀释10倍.[结果]经过9轮筛选,得到能特异性识别SM2的SA07核酸适配体(TrAGCTrATGCGTTGGC CGGGATAAGGATCCA GCCGTTGTAGATrTGCGTTCTAACTCTC),其解离常数为79 nM.在牛奶样品中方法的检测限为0.92ng/mL,线性范围为1.85-21.57 ng/mL,并且该方法对其他27种磺胺类药物的交叉反应率均较低,回收率为88.0-98.2％,变异系数为10.0-23.4％.[结论]本研究成功筛选得到了对SM2具有高特异性与亲和力的核酸适配体,以其作为识别工具建立了牛奶中检测SM2的直接竞争化学发光检测方法,该方法特异性良好,回收率与变异系数均满足残留检测要求.
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