【摘 要】
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分布在中国新疆伊犁河谷等地的野杏是第三纪暖温带阔叶林的孑遗植物群落,分布区域广阔,具有庞大的实生群体和丰富的遗传多样性。建立适合杏流式细胞术检测体系,探讨新疆野杏的倍性和DNA含量,为杏属植物基因组学和遗传进化研究提供基础数据。合适的细胞核解离液是流式细胞术能否成功的主要影响因素,而不同植物的渗透压和内含物不同等因素会造成其最适缓冲液不尽相同。对10种常用的解离液进
【出 处】
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中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集
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分布在中国新疆伊犁河谷等地的野杏是第三纪暖温带阔叶林的孑遗植物群落,分布区域广阔,具有庞大的实生群体和丰富的遗传多样性。建立适合杏流式细胞术检测体系,探讨新疆野杏的倍性和DNA含量,为杏属植物基因组学和遗传进化研究提供基础数据。合适的细胞核解离液是流式细胞术能否成功的主要影响因素,而不同植物的渗透压和内含物不同等因素会造成其最适缓冲液不尽相同。对10种常用的解离液进行筛选与优化,选取新疆野杏不同试验材料(幼叶、老叶)和保存方式(新鲜、冷藏、液氮保存),以紫花苜蓿为外标,检测细胞倍性和DNA含量。结果显示,Tris·MgCl_2、GPB、OTTO解离液制备的悬浮液收集细胞数较少,甚至未能形成峰值,不能将细胞核完整释放出来。HEPES、Galbraith’s、WPB、mGb解离液制备的悬浮液均呈现单侧峰,即为碎片峰,该解离液与试验材料并不匹配。LB01、Marie’s解离液制备的第1个峰略宽,且在G2/M期未形成峰值。MgSO_4解离液制备的样本峰形效果较好,其第1个峰为左右对称的峰,收集完整的细胞核相对较多,但主峰的右侧出现较多背景碎片,有明显的干扰峰,还有待进一步优化。与上述10种解离液相比,MgSO_4-LB01解离液制备的样品峰形更好,且上样速度较快,速率达150events·μL~(-1),双峰分别代表G0/G1期和G2/M期,G0/G1峰值平均值为82271.26,变异系数(CV)为3.21%。除了包含活跃分裂细胞的分生组织外,大多数细胞处于G0/G1期。与G0/G1期细胞相比,G2/M期细胞含有2.04倍的DNA。说明MgSO_4-LB01解离液可作为提取杏细胞核适宜的解离液。新鲜幼嫩叶片,使用经优化的MgSO_4-LB01混合解离液制备样品进行检测,其CV最低,上样速率达150events·μL~(-1)。随着试材冷藏时间的增长,样品CV值越大。冷藏4d以内的幼嫩叶片检测的CV值在5%以内,老叶及液氮保存的叶片制备细胞核悬浮液CV值较高,呈现出分辨率差的峰,背景碎片较多。新鲜或冷藏4d之内的幼嫩杏叶片是进行流式细胞术检测的理想材料,经优化的MgSO_4-LB01混合液是最适解离液,利用流式细胞术可以快速准确地检测杏属植物的倍性及DNA含量。本试验检测了伊犁新源和巩留两个居群共计20个样本,结果表明为均为二倍体,野杏细胞核DNA含量范围为288～321Mbp·C~(-1),平均值为301.21Mbp·C~(-1)。
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