【摘 要】
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目的：检测变应性鼻炎大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中p38蛋白激酶(p38MAPK)的表达,探讨p38 MAPK对外周血单个核细胞Th2类细胞因子IL-4,IL-5表达的调控作用.方法 ①建立变应
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科 重庆 400016
【出 处】
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2012年全国鼻部感染与变态反应疾病暨鼻肿瘤专题学术会议
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目的：检测变应性鼻炎大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中p38蛋白激酶(p38MAPK)的表达,探讨p38 MAPK对外周血单个核细胞Th2类细胞因子IL-4,IL-5表达的调控作用.方法 ①建立变应性鼻炎大鼠模型：使用卵清蛋白及氢氧化铝腹腔注射致敏,卵清蛋白行鼻腔激发.采用鼻部症状叠加量化记分法确定造模是否成功.②细胞培养：心脏穿刺收集抗凝血液,通过密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMCs).调整细胞浓度后将PBMCs接种于24孔培养板(1×106/每孔),分别给予不同浓度的p38 MAPK抑制剂SB 239063,置于37℃、含5％C02培养箱内中培养24 h.③实时定量RT-PCR：采用Trizol一步法从PBMCs中提取总RNA.PCR反应条件如下：95℃起始变性30 s,95℃扩增5 s、57℃退火20 s进行45个循环.采用2-△△CT法计算基因相对表达量.④细胞因子测定：收集24 h细胞培养上清液.使用ELISA试剂盒测定IL-4、IL-5蛋白含量.⑤统计分析：采用SPSS 12.0统计软件包进行数据分析,数据以均数±标准差表示,独立样本T检验和方差分析用于统计学分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结论：p38 MAPK在变应性鼻炎Th2类细胞因子的表达中发挥重要作用。
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