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目的:观察人脐血源基质细胞对单倍体造血干细胞移植小鼠GVHD调节作用.
方法:体外采用人脐血源基质细胞与小鼠淋巴细胞共培养,采用CCK-8检测小鼠淋巴细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期和CD3T细胞及CD49b NK细胞和粘附分子CD49d(VLA-4)表达变化,ELISA检测共培养上清中IL-4、IFN-γ的表达变化.构建单倍体造血干细胞移植小鼠模型,共同输注人脐血源基质细胞,观察移植小鼠生存率,GVHD临床表现,GVHD的病理以评价GVHD严重程度,流式细胞仪检测移植后小鼠CD3T细胞及CD49b NK细胞和粘附分子CD49d(VLA-4)的表达变化,ELISA检测共培养上清中IL-4、IFN-γ的表达变化.采用CM-DiI标记人脐血源基质细胞,观察其在移植细胞体内的迁移分布情况.
结果:hUCBDSCs具有促进混合淋巴细胞培养体系中的淋巴细胞增殖的作用,hUCBDSCs联合rhIL-2促增殖作用更强(p<0.05),hUCBDSCs培养上清无促增殖作用;hUCBDSCs明显增加混合淋巴细胞培养体系中淋巴细胞S期和G2/M期的比例(p<0.05);hUCBDSCs和hBMSCs均促进CD49b NK细胞、降低CD3T细胞和粘附分子CD49d(VLA-4)的表达,hUCBDSCs的作用更强(p<0.05);hUCBDSCs和hBMSCs均促进IL-4、降低IFN-γ表达,hUCBDSCs的作用更强(p<0.05).hUCBDSCs明显降低移植小鼠的死亡率,延长其生存期(p<0.05);组织病理学评分及GVHD临床积分均显示联合hUCBDSCs移植组小鼠GVHD发生程度明显低于单纯BMT组(p<0.05);联合hUCBDSCs移植明显促进受体小鼠外周血中IL-4表达,抑制IFN-γ表达(p<0.05);联合hUCBDSCs移植增加受体小鼠脾脏CD49b NK细胞、降低CD3T细胞及粘附分子CD49d的表达(p<0.05);联合hUCBDSCs移植明显降低GVHD靶器官粘附分子CD49d(VLA-4)的表达(p<0.05).CM-DiI标记的hUCBDSCs早期在HLA半相合造血干细胞移植小鼠的大多数器官中表达,其后主要在骨髓、免疫器官脾脏及皮肤、肝脏及小肠等GVHD主要靶器官中持续表达,而在其它器官中,表达逐渐减弱,甚至消失.
结论:人脐血源基质细胞具有调节单倍体造血干细胞移植细胞GVHD的作用,其可能通过调节CD3T和CD49b NK细胞、粘附分子CD49d及细胞因子起作用.