【摘 要】
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目的：分别设计能特异切割HBV、HCV基因组的核酶、U1-嵌合体核酶、10-23脱氧核酶(10-23DNAzyme)及小干涉RNA，以期用于乙、丙型肝炎的基因治疗。方法：⑴设计合成针对HCV RNA基因组非编码区及核心区特定位点的三种核酶，克隆入质粒载体pGEM并进行体外转录，对HCV基因组进行体外切割；⑵选择其中切割效率最高的核酶与U1小核糖核酸构建成嵌合体核酶，观察在试管及细胞水平对HCV R
【机 构】
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吉林大学第一医院 感染科 130021
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目的：分别设计能特异切割HBV、HCV基因组的核酶、U1-嵌合体核酶、10-23脱氧核酶(10-23DNAzyme)及小干涉RNA，以期用于乙、丙型肝炎的基因治疗。
方法：⑴设计合成针对HCV RNA基因组非编码区及核心区特定位点的三种核酶，克隆入质粒载体pGEM并进行体外转录，对HCV基因组进行体外切割；⑵选择其中切割效率最高的核酶与U1小核糖核酸构建成嵌合体核酶，观察在试管及细胞水平对HCV RNA的切割效率；⑶设计针对HBV前C／C区的10-23DNAzyme，对底物HBV mRNA进行体外切割；⑷设计合成针对HCV 5，-NCR区不同位点的10-23DNAzyme，观察不同镁离子浓度及时间下对HCV的切割效率。⑸设计针对HBV前C／C区的小干涉RNA，在Hepg2215细胞水平观察其对乙型肝炎病毒复制和表达的抑制作用。
结果：核酶及U1小核糖核酸嵌合体核酶在试管及细胞水平对HCV RNA均具有切割活性，二者的切割活性基本相等；核酶的切割位点越靠近起始密码子则其切割效率越高；10-23DNAzyme在试管及细胞水平对HBV前C／C区mRNA有高效活性，能有效抑制HBV复制及表达；针对HBV及HCV基因组设计的小干涉RNA在细胞水平能有效抑制HBV及HCV的复制和表达。
结论：核酶、U1嵌合体核酶、10-23脱氧核酶在试管及细胞水平中都显示了较高效的抗HBV、HCV作用；小干涉RNA在细胞水平能有效抑制HBV及HCV的复制和表达。作为有前途的基因治疗药物可以进一步用于动物实验研究。
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