纳米金基因芯片检测系统结合通用引物一次PCR法检测病原性细菌的研究

来源 :第五次全国中青年检验医学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jj1385173
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目前基因芯片技术广泛应用于临床仍存在着一些困难,其中一个共性的问题就是样品制备方面的不足:即通常为提高检测灵敏度和特异性,需针对各检测对象分别设计引物,甚至建立不同的扩增体系、扩增方法和扩增条件,来进行多重的PCR扩增.这显然大大增加了工作量和工作难度,从而在一定的程度上限制了芯片技术的高通量、高速度的发挥,严重制约了病原微生物的芯片检测在临床及其他环境的广泛应用. 本研究针对多重PCR法芯片检测样品制备方法的不足,在我们自行研制的专利技术--纳米金新型基因芯片检测系统的基础上进一步结合细菌rDNA的基因分型技术构建了通用引物一次PCR法的样品制备技术,进行临床病原性细菌的芯片检测分析.即期望通过一次PCR扩增,就可以完成对所有检测样本的处理制备,从而大大减少临床微生物芯片检测的步骤和复杂性,节省检测时间,为今后建立高通量、高速度的临床微生物检测芯片及其广泛应用奠定基础。
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本文利用流式细胞仪技术分析病毒作用三种人胰岛β细胞CM、HP62、TRM6以及正常人胰岛β细胞(NormalBetaCell,NBC)前后细胞表面表达CD56的变化。研究结论:随着病毒作用人胰岛β细胞时间的延长,细胞表面CD56表达量下降,CD56是否在IDDM致病中起作用有待进一步研究。
本文对40株经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMV-UL140全序列PCR扩增,将扩增阳性的PCR产物中具有代表性的11株进行UL140基因全序列测定及结果分析。研究结论:临床低传代分离株HCMV-UL140基因DNA及其编码产物的氨基酸序列与Toledo株比较存在一定多态性;未发现HCMVUL140基因多态性与HCMV感染不同致病性有关。
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本文为建立金属β内酰胺酶基因(blaIMP)简并引物聚合酶链反应方法,从美国国立生物信息中心(NCBI)[www.ncbi.nlm.nih.gov]检索已登录的blaIMP基因,自行设计简并引物和PCR反应体系。研究结论:简并引物PCR法检测blaIMP基因的建立将有利于产金属β内酰胺酶菌筛查和监测。
本文用大肠杆菌表达系统分别表达了SARS-CoV的结构蛋白S、N、M、E和非结构蛋白3CL,并用SARS恢复期患者血清对重组病毒蛋白的抗原性的进行了Western-blot分析;再根据表达载体的多克隆位点和阅读框架的要求,分别合成各抗原基因引物,以合成的基因为模板,扩增相应的抗原基因。研究结果表明,N抗原和S抗原可作为SARSCoV感染的重要检测抗原.
本文将汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G1基因与Ras基因连接,构建嵌合基因Ras-G1及Ras-G1(G1无前导肽序列);将两个嵌合基因克隆入酵母表达载体pMet25,并染至酵母温度敏感株cdc25-2,并检测其对RRS系统的激活作用。研究结论:Met-G1和Met-G1载体可用于从cDNA文库中筛选汉滩病毒受体。
本文根据毕赤酵母密码子偏性合成了人IFN-β1a基因,克隆至分泌型酵母表达载体pMEX9K,将重组载体pMEXbeta线性化后,电转化毕赤酵母GS115,用甲醇诱导转化子,细胞病变抑制法测定诱导上清的抗病毒活性筛选高表达克隆,WesternBlot检测人IFN-β的表达。研究结论:具有抗病毒活性的人IFN-β在毕赤酵母中获得表达。
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