柔嫩艾美尔球虫Ⅱ型丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶(EtMAT)不同表达载体的构建及其优化表达策略

来源 :中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuyong19840815
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利用生物信息学技术预测了柔嫩艾美尔球虫Ⅱ型丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶基因序列,分别设计引物扩增完整ORF,去除信号肽而保留转导肽以及去除信号肽和转导肽的功能区域序列片段;选取pMAL-c2x、pET-32a(+)和pProExHTa3种不同的表达载体,分别构建重组表达质粒,转化到宿主大肠杆菌Rosseta(DE3),在不同条件下诱导表达,利用酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶连系统测定表达产物活性。表达分析结果显示,只有功能区域片段能够表达,且Rosseta(DE3)/pMAL-c2x—mat表达量、水溶性成分较Rosseta(DE3),pET-32a(+)-mat高,但二者可溶性表达产物酶活性相似;Rosseta(DE3),pET-32a(+)-mat、Rosseta(DE3)/pMAL-c2x-mat随着诱导温度的降低其蛋白表达量和可溶性成分增加,但温度的降低对Rosscta(DE3)/pProExHTa-mat的表达没有明显改善,仅能表达不可溶性蛋白,且复性后无酶活性。
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