【摘 要】
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为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)病毒的遗传变异特征,经Marc-145细胞分离与传代,从2006-2013年间采集自山东、河南、河北发病猪场的70余例病变样本中获得18株
【机 构】
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山东省滨州畜牧兽医研究院兽医生物技术重点实验室,山东滨州256600山东绿都生物科技有限公司,山东滨州256600
【出 处】
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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会
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为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)病毒的遗传变异特征,经Marc-145细胞分离与传代,从2006-2013年间采集自山东、河南、河北发病猪场的70余例病变样本中获得18株PRRSV分离株,并设计ORF5基因引物,RT-PCR扩增其ORF5基因序列并克隆测序,应用MegAlign (DNAStar)和ClustalXl.83软件将所得的18个分离株GP5序列与GenBank中登录的的68株PRRSV GP5序列进行比较分析,应用MEGA4软件绘制系统发生进化树.运用DNASTAR、TMHMM等在线工具等软件分析GP5中和抗原表位、诱骗表位、N-糖基化位点、转膜区序列等信息.细胞分离培养表明,所获得18株分离株在Marc-145细胞中的增殖特性有一定差异,传代3代后TCIDs0为0～10-6.5/0.1 mL不等,蚀斑大小1.1～9.0mm不等.序列比较结果表明,18株分离株之间的氨基酸同源性为85.6％～99.5％,有16株与已知变异株的亲缘关系较近,与JXA1株的氨基酸同源性为95.5％～97.5％,与CH-la株同源性为89.6％～91.5％；另2株(HN25、SDDY2007)与经典美洲株VR-2332株亲缘关系相近,氨基酸同源性分别为97.5％和98.5％.遗传进化树分析,2006年至今分离的绝大部分毒株均处于以JXA1为代表的一个分支中,只有HN25和SDDY两株与VR-2332及两株疫苗株亲缘关系较高.三省区PRRSV的GP5蛋白遗传进化无明显地域分布特征,但2009年度病毒株在进化树中的分布相对集中.氨基酸基序变异分析结果表明,SDBZ2009等16株变异株自15aa～32aa预测为跨膜结构,与经典株跨膜结构预测情况存在较大差异.抗原性分析表明,与经典株相比,变异株的抗原性在30aa～37aa、192aa～198aa两个区域有减弱趋势,在128aa～134aa、162aa～169aa和180aa～186aa三个区域有增强趋势,部分变异株第33位至35位氨基酸的变异可能改变了蛋白N-糖基化位点的数量和位置.
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