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目的:骨折是临床常见的放疗后遗症,严重影响肿瘤幸存者的生活质量,即使是局部放疗也可能引起全身包括非受照区域骨骼的损伤效应,而对其病因机理和病程转归等仍不明确,预防和改善这种损伤效应的临床干预措施尚缺乏.本研究通过建立共培养体系观察γ射线照后大鼠原代成骨细胞对未受照成骨细胞生物学特性影响的时间效应与剂量效应作用。
方法:体外分离培养大鼠头盖骨成骨细胞。初步实验用5Gy137Csγ射线预作用成骨细胞,照射后分别培养2h,24h,48h,72h再与未受照成骨细胞共培养观察时间效应并作为剂量效应实验基础。另一部分成骨细胞接受137Csγ射线不同剂量照射后2h再与未受照成骨细胞共培养分为六组:①单独培养组(成骨细胞单培养);②共培养0Gy组;③共培养1Gy组(成骨细胞细胞经137Csγ射线1Gy处理,再与未受照成骨细胞共培养);④共培养5Gy组⑤共培养10Gy组⑥共培养15Gy组。通过相差显微镜观察细胞形态,应用MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性,应用Real-time PCR方法检测共培养体系中成骨细胞的骨钙素(OC)、碱性磷酸酶(ALP)、护骨素(osteoprotegerin,OPG)、护骨素配体(RANKL)、Caspase3 mRNA表达。
结果:研究表明,共培养未受照成骨细胞增殖分化能力在5Gy-2h低于假照组,下降明显且有统计学意义(p<0.05)。照后2h观察剂量效应结果表明,与假照组相比,各个剂量组增殖分化能力均呈不同程度降低,在5Gy时对增殖和分化抑制明显(p<0.01)。共培养组成骨细胞的骨形成相关基因ALP、OC、OPG、RANKL mRNA表达较假照培养组显著降低(p<0.001),但RANKL/OPG比值升高,Caspase3基因表达也有上调,在5Gy和10Gy剂量组有统计学意义。
结论:受照成骨细胞对共培养未受照OB生物学功能如增殖、分化、骨代谢基因表达具有直接的调节作用。建立的共培养体系可用于辐射骨代谢损伤远端效应细胞分子机制研究。