【摘 要】
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目的：本研究旨在通过构建西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG1)的重组腺病毒(Adenovirus,Ad)超表达载体,研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响,为该基因在山羊
【机 构】
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西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌712100
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目的：本研究旨在通过构建西农萨能奶山羊胰岛素诱导基因1(INSIG1)的重组腺病毒(Adenovirus,Ad)超表达载体,研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂质合成的影响,为该基因在山羊乳腺脂质合成调控中的功能研究奠定基础.
方法：PCR扩增得到INSIG1基因CDS区序列.通过同源重组,获得pAdEasy-INSIG1重组腺病毒质粒.转染293A细胞进行病毒的包装及扩繁,利用LaSRT法测定其滴度.将Ad-INSIG1腺病毒感染山羊原代乳腺上皮细胞,利用qRT-PCR检测INSIG1及脂质合成相关基因的mRNA表达情况,利用GPO-Trinder酶学反应检测细胞中甘油三酯的含量.
结果：成功构建了奶山羊INSIG1基因重组腺病毒超表达载体,获得了具有较高滴度(2×108U·mL-1)的超表达腺病毒Ad-INSIG1;Ad-INSIG1感染山羊原代乳腺上皮细胞48h后,与Ad-GFp组相比,INSIG1基因的mRNA表达量上调约500倍,SREBP1及SCAp的mRNA表达量无明显变化,参与脂肪酸从头合成(ACCα、FASN)、去饱和(SCD1)及甘油三酯合成(GPAM及DGAT2)等基因的mRNA表达量显著下降(p＜0.05);同时,催化甘油三酯分解(ATGL)的基因mRNA表达量也显著下降(p＜0.05);细胞内甘油三酯含量无显著变化.
结论：综上所述,在山羊原代乳腺上皮细胞中,INSIG1能够抑制脂质合成相关基因的表达,对山羊乳腺脂质合成具有调控作用.
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