【摘 要】
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根据本实验室新发现的鸭瘟病毒(DPV)dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)序列设计一对引物,PCR扩增产物亚克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU后将其转化至E.
【机 构】
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四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,雅安,625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛
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根据本实验室新发现的鸭瘟病毒(DPV)dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)序列设计一对引物,PCR扩增产物亚克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU后将其转化至E.coli BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白大小约为66.8ku,与预期表达蛋白大小一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36.2％,主要以包涵体的形式存在。重组蛋白纯化后制备兔抗血清间接ELISA效价为1:409600。通过免疫荧光技术进行DPV dUTPase亚细胞定位检测,结果显示特异性荧光可最早在感染后4h的胞质中检测到,12h大量点状绿色荧光聚集于胞核；24h后胞核内点状荧光减弱而胞质点状荧光增强；48h胞核和胞质荧光均显著减弱。以上结果为DPV dUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据。
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