【摘 要】
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对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计一对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对弱毒疫苗的特异引物,扩增片段为237bp。该方法能将我国流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与其他猪源病毒和牛病毒性腹泻病病毒发生非特异反应。应用本研究建立的反转录.复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)
【机 构】
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山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600 山东农业大学动物科技学院,山东泰安,271018
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计一对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对弱毒疫苗的特异引物,扩增片段为237bp。该方法能将我国流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与其他猪源病毒和牛病毒性腹泻病病毒发生非特异反应。应用本研究建立的反转录.复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法可以及早对猪瘟做出准确诊断,并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来,减少了未感染免疫猪被误杀的可能性。
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通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经E.caRV和xba I双酶切后连接构建真核表达质粒pVAX Ⅰ-P1-2A,将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测.再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验,结果酶切结果与预期目的条带大
为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究利用特异性引物从重组质粒PMD-2E8SCFv和PMD-gE中PCR扩增得2E8基因(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和kgE基因(PRVgE主要抗原编码区),采用重叠延伸(SOE)PCR法拼接成融合的双功能分子2E8kgE,经BamHI和EcoRI双酶切处理,纯化后,克隆至BamHI和EcoRI双酶切处理的表达载体pET-Trx中,构建了原核表
根据GenBank中猪细小病毒PPV NADL-2株NS1序列设计了一对引物,以本课题组保存的PPVS-1分离株不同传代代次的DNA为模板,进行PCR扩增,将扩增产物分别克隆到pGEM-T载体中进行测序。结果表明,扩增片段长约2.2kb,包含完整的NS1基因,共编码662个氨基酸。应用DNAStar软件进行序列分析,结果显示所有代次的Ns1核苷酸同源性在99.4％以上,氨基酸同源性在98.5％以上
观察不同温度对猪细小病毒N株血凝活性的影响,结果表明,猪细小病毒N株在37"C条件下十分稳定,作用28d血凝滴度变化不大,只下降1-3个滴度;在60℃恒温水浴下的血凝滴度变化缓慢,血凝滴度在前7d-直稳定;随着温度的升高,病毒血凝的稳定性迅速降低,短时间内即可失去血凝活性,在75℃ 1h、80℃ 10min、85℃ 5min,检测不出病毒血凝活性。由此证明,猪细小病毒N株在37、60℃时血凝活性十
流感病毒M2蛋白五个关键位点氨基酸残基(第26、27、30、31和34位)中的任何一个发生突变会导致抗流感病毒药物中金刚烷胺抗药性的产生。本研究利用焦磷酸测序技术对2004年-2008年国内分离的10株猪流感病毒进行了鉴定,并初步进行了抗药性分析。结果表明基于M2蛋白基因保守区序列建立的焦磷酸测序技术能用于国内猪流感病毒的快速检测,且具有较好的特异性和重复性。抗药性分析表明10株猪流感病毒国内分离
应用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟抗体,IHA试验以1：16为判定孔,抗体效价大于或等于1：16为抗体阳性;ELISA试验以抗体阻断率40％为判定标准,阻断率大于或等于40％为抗体阳性,同步检测了122份规模化猪场不同阶段猪血清,结果ELISA检测抗体阳性率比IHA检测抗体阳性率低,阴性、阳性相符的血清数为92,相关性为75.4％,不同抗体水平分布的血清数也不同,个
选择没有注射过口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗的30日龄左右仔猪45头,随机分成三个组。每组15头。其中对照组间隔10d分别注射O型口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗。试验1组分点同时注射O型口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病疫苗,试验2组分点同时注射O型口蹄疫和猪瘟疫苗,间隔10d后注射高致病性猪蓝耳病疫苗。免疫后30d、60d、9叫分别采集血清,监测。型口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病免疫抗体,抗
应用猪O型口蹄疫合成肽疫苗、猪O型口蹄疫灭活疫苗两种疫苗分别免疫仔猪,观察疫苗反应情况,经口蹄疫O型液相阻断ELISA和猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白ELISA交叉检测,确定两种疫苗的免疫效果,比较两种实验方法。结果显示猪O型合成肽疫苗免疫转阳率高于猪O型口蹄疫灭活疫苗,口蹄疫O型液相阻断ELISA不适合检测猪O型合成肽疫苗免疫抗体。
目前,我国口蹄疫疫苗生产和检验依然采用乳鼠测毒法,经生产实践证明该检验方法较为繁琐,费时费力,严重影响了检验效率。本实验室前两年用正常的BHK-21细胞测定TCID50,结果由于普通BHK-21细胞在达到判定时间的时候,大量细胞已老化脱落,造成后期染色结果不准确,与乳鼠测毒法结果差异较大。后来又引进了转化BHK-21细胞,专用于检测口蹄疫病毒,经试验证明与乳鼠测毒法取得了较为一致的检验结果,经证明
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