论文部分内容阅读
【目的】吸烟是动脉粥样硬化等血管性疾病的独立危险因素,尼古丁是烟草中的主要有害成分。内皮一间质转化(Endothelial to mesenchymal transition,EndMT)是血管内皮细胞失去内皮表型而获得间充质表型的转变过程。本研究旨在探究EndMT在尼古丁诱发动脉粥样硬化中的作用及长链非编码RNA(Long Non-Coding RNAs,lncRNAs)在其中的调控作用。【材料和方法】收集临床手术动脉组织(吸烟组和非吸烟组),建立尼古丁诱发动脉粥样硬化动物模型(ApoE-/-小鼠:对照组和尼古丁组),免疫组化原位检测主动脉内皮EndMT相关蛋白(CD3 1、α-SMA)的表达;提取主动脉内膜RNA,real-time PCR检测EndMT相关基因的表达量变化。培养人主动脉内皮细胞系(Human aortic endothelia cells,HAECs),分为对照组和尼古丁组,应用倒置相差显微镜观察内皮细胞形态;收集细胞RNA和蛋白,利用Real timePCR技术和Western blot技术检测EndMT相关基因(CD31、VE-cadherin、α-SMA、FSPl)的表达;免疫荧光技术检测EndMT相关蛋白的表达和分布;运用Transwell标记物漏出法及单层细胞跨膜电阻测定实验检测内皮通透性。将HAEC细胞系分为对照组和尼古丁组,收集其RNA,使用Arraystar Human LncRNA Array V3.0芯片进行lncRNA表达谱芯片检测,筛选出差异表达的lncRNA,应用生物信息学分析方法进行数据处理,筛选出与EndMT相关的lncRNA。【结果】临床手术动脉组织吸烟组与非吸烟组相比,ApoE-/-小鼠尼古丁组与对照组相比,血管内皮细胞相关蛋白CD31、VE-cadherin表达下调,间质细胞相关蛋白α-SMA、FSP1表达上调。尼古丁刺激HAEC后,内皮细胞形态由卵圆形变成长梭形,内皮细胞相关基因CD31、VE-cadherin表达下调,间质细胞相关基因α-SMA、FSP1表达上调。Transwell标记物漏出法及单层细胞跨膜电阻测定实验发现尼古丁显著增强内皮通透性。lncRNA表达谱芯片检测显示尼古丁处理组与对照组相比lncRNA差异表达显著。【结论】尼古丁通过诱导血管内皮细胞发生EndMT来诱发动脉粥样硬化,尼古丁可显著改变内皮细胞IncRNA表达,lncRNA可能是EndMT的关键调控分子。