【摘 要】
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目的 探讨硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S)是否可以通过上调SIRT1拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞衰老.方法 Cell counting Kit-8 (CCK8)法检测细胞的活性；β-半乳糖苷酶染色法(Senescence Associated acidic-β-Galactosidase SA-β-Gal)、台盼蓝计数求细胞生长曲线及Western Blotting检测细胞衰
【机 构】
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南华大学生理学教研室;南华大学附属第二医院神经内科 南华大学附属第二医院神经内科
【出 处】
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湖南省生理科学会2015年度学术年会暨第十届理事会换届选举大会
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目的 探讨硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S)是否可以通过上调SIRT1拮抗同型半胱氨酸诱导HT22细胞衰老.方法 Cell counting Kit-8 (CCK8)法检测细胞的活性；β-半乳糖苷酶染色法(Senescence Associated acidic-β-Galactosidase SA-β-Gal)、台盼蓝计数求细胞生长曲线及Western Blotting检测细胞衰老相关蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白的表达评价HT22细胞衰老；Western Blotting检测沉默信息调节因子1(Silent mating type information regulation homolog 1,SIRT1)蛋白的表达；罗丹明123 (Rh123)染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位；Annexin V/PI染色流式细胞仪和Hoechst33258染色检测细胞凋亡.结果 1.Hcy (2.5、5、10 mmol/L)处理HT22细胞48h后,SA-β-Gal阳性细胞明显增加,衰老负性调控蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表达明显上调,细胞生长曲线明显呈下降趋势,表明Hcy能诱导HT22细胞衰老.2.NaHS (H2S供体,100、200、400 μ mol/L)可呈浓度依赖性地抑制Hcy(5mmol/L,48 h)诱导HT22细胞SA-β-Gal染色阳性细胞增加,P16INK4a、P21CIPL蛋白表达上调及细胞生长曲线下降趋势,表明H2S可拮抗Hcy诱导HT22细胞衰老.3.Hcy (2.5、5、10 mmol/L)处理HT22细胞48小时后,细胞SIRT1蛋白的表达呈浓度依赖性下调,表明Hcy可抑制HT22细胞SIRT1蛋白的表达.4.NaHS (100、200、400 μ mol/L,48h)可浓度依赖性地上调HT22细胞SIRT1蛋白的表达,而且可逆转Hcy(5 mmol/L)处理HT22细胞后SIRT1蛋白表达的下调作用,表明H2S可上调HT22细胞SIRT1的表达.5.SIRT1抑制剂Sirtinol (15 μmol/L)可逆转NaHS (400 μmol/L)对Hcy(5mmol/L,48 h)增加HT22细胞中SA-β-Gal染色阳性细胞比例、上调衰老相关关键蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表达以及促进细胞生长曲线下降趋势的阻断作用,表明SIRT1对H2S抑制Hcy诱导HT22细胞衰老具有介导作用.结论 H2S通过上调SIRT1拮抗Hcy诱导HT22细胞衰老.
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