研究背景:T细胞在抗肿瘤应答中发挥着重要作用,由于肿瘤患者体内肿瘤抗原特异性T细胞的无能与清除,T细胞过继免疫治疗作为一种治疗肿瘤的方法,越来越得到重视。但T细胞过继免疫治疗受限于获得肿瘤抗原特异性高亲和力的TCR和足够数量的抗瘤T细胞,以及过继治疗可能伴随的移植物抗宿主反应(Gv H R)。从同种T细胞库中制备肿瘤抗原特异性高亲和力的TCR,克隆这种高亲和力的TCR用来修饰自体正常的T细胞,似乎可以解决这些问题。本研究为验证克隆肿瘤抗原特异性高亲和力的TCR的可行性而设计,为肿瘤抗原特异性高亲和力TCR的制备提供实验依据。目的:构建Jurkat细胞TCR编码基因的双基因表达载体TCRα-p I RES-TCRβ,为后期进一步克隆同种反应性高亲和力TCR提供技术支持和依据。方法:提取Jurkat细胞的 RNA,利用 RT-PCR技术获得编码Jurkat细胞TCR的全长基因序列,通过基因克隆技术构建含Jurkat细胞TCR编码基因的双基因表达载体TCRα-p I RES-TCRβ,同时利用限制性酶切分析、测序分析和PCR分析技术鉴定重组表达载体的正确性。结果:成功构建了含Jurkat细胞TCR编码基因的双基因表达载体TCRα-p I RES-TCRβ。结论:构建了TCR基因表达载体,为后续构建肿瘤抗原特异性高亲和力TCR的基因表达载体提供了基础研究资料。