【摘 要】
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目的 寻找到脂肪组织中的干细胞群体及其标志,位置,探究成脂相关通路如胰岛素通路等在细胞中的表达状况。方法 用2周龄SD大鼠皮下腹股沟脂肪组织块贴壁法和胶原酶消化法
【出 处】
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中国医师协会美容与整形分会西南工作委员会成立大会暨首届西南美容与整形学术大会
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目的 寻找到脂肪组织中的干细胞群体及其标志,位置,探究成脂相关通路如胰岛素通路等在细胞中的表达状况。方法 用2周龄SD大鼠皮下腹股沟脂肪组织块贴壁法和胶原酶消化法培养并收集前成脂细胞,再采用96孔板有限稀释法和平板有限稀释法培养并挑取单个细胞形成的克隆,再对其进行扩增培养,其间计数细胞计算其倍增时间,克隆形成能力,增长曲线,并观察其衰老状况,同时对培养所得的多个细胞亚克隆进行成脂,成骨,成神经,成软骨等多向诱导,并通过特征染色、荧光定量RT-PCR检测成脂成骨成神经成软骨相关基因如PPAR-γ、Prefl、Osteocalcin、ALP、nestin、NSE比较各亚群分化能力的强弱,以期寻找到增殖能力强且分化能力也强的细胞亚克隆,再对其细胞进行鉴定,通过流式细胞仪检测脂肪间充质干细胞表面分子标志STRO-1、CD29、CD44、CD54、CD105、CD49(d)及造血干细胞标志Sca-1、lin等的表达状况、免疫荧光及western blot检测细胞中标志蛋白PPAR-γ、C/EBPα、IGF-1、GATA-2、COUP-TF Ⅱ等及细胞膜表面各种通路受体如IGF-1R、GLUT4、PDGF、frizzledl或5、LRP5及frizzled2或7等的表达状况、RT-PCR检测成脂及间充质干细胞相关基因PPAR-γ、C/EBPα等的表达状况,通过脂肪组织切片的免疫组化检测该细胞亚群的位置。结果 脂肪间充质干细胞位于脂肪组织脉管系统基质中,高表达PPAR-γ,Sca-1+,lin-。培养出前成脂细胞系,表达STRO-1,CD29,CD54等表面标志。各亚克隆多向诱导分化能力差别无统计学意义。结论 脂肪细胞异质性由两方面产生,即由不同来源的祖细胞产生子细胞,和由同一来源的祖细胞产生的子细胞处于不同生理状态而产生,而造血系来源的脂肪干细胞具有更强干性,但其在皮下脂肪中只占很小比例,因此皮下脂肪细胞的异质性主要来源于处于不同生理状态的同一来源的子细胞。
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