嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是水环境中常见的病原菌,对水产动物尤其是鱼类具有广泛的致病性。而每年数以万吨的抗生素被用于水产养殖业,导致细菌耐药性日益增强以及自然环境急剧恶化。外膜蛋白是革兰氏阴性细菌细胞膜通透性与外排泵系统的直接承担者,在细菌耐药中起关键作用。然而,目前为止对嗜水气单胞菌外膜蛋白相关的耐药功能知之甚少。本研究运用TMT标记定量蛋白质组学技术比较分析了嗜水气单胞菌抗生素敏感株在不同浓度的土霉素胁迫下(适应性耐药)和耐药菌株(获得性耐药)的外膜蛋白表达差异。结果 表明,抗生素敏感株在2×MIC(5 g/ml)和4×MIC(10 g/ml)浓度的土霉素胁迫下,分别有125和150个蛋白发生差异表达,其中外膜蛋白分别占16％和14％；而在获得性耐药的差异蛋白中,外膜蛋白占16％。生物信息学分析发现,在两种耐药形式中,参与翻译途径的相关蛋白表达水平都呈现上升趋势,而与转运途径相关的蛋白表达量均显著下降。然后,利用Western blotting和qPCR技术对差异表达蛋白的变化进一步验证。此外,还利用基因敲除技术获得一些差异表达的外膜蛋白的缺失株, 比如ΔAHA_2699,ΔAtHA_1280,ΔAHA_2766,ΔAHA_4281和ΔAHA_1181,并进一步测定缺失株对抗生素的MIC发现,这些外膜蛋白的缺失会影响嗜水气单胞菌对抗生素的耐受性。以上研究结果揭示了嗜水气单胞菌通过外膜蛋白来适应抗生素胁迫的分子机制,发现了新的细菌耐药相关外膜蛋白,并为深入了解嗜水气单胞菌的耐药机制提供了强有力的理论依据。