研究背景:TSP50是一种苏氨酸蛋白酶,其在肿瘤发生及发展过程中发挥重要作用。但目前为止,有关TSP50对免疫功能的影响尚不清楚。目的:本文拟详细探讨过表达TSP50的细胞上清对巨噬细胞吞噬及分泌功能的影响,并对其机制进行初步研究。方法:构建稳定表达TSP50的CHO细胞株,并利用Real-time RT-PCR和ELISA方法检测过表达TSP50的细胞和上清中细胞因子的变化;用过表达TSP50的细胞上清和上清中显著变化的因子分别对巨噬细胞(THP-1以及原代小鼠腹腔巨噬细胞)进行处理,利用鸡红细胞吞噬实验和酵母吞噬实验检测巨噬细胞吞噬功能的变化,利用Real-time RT-PCR方法检测巨噬细胞分泌细胞因子的变化;并进一步利用Western Blot方法探究影响巨噬细胞功能改变的细胞内信号转导途径;最后,通过检测巨噬细胞中分化标志物的表达情况,确定巨噬细胞的分化表型。结果:在过表达TSP50的细胞和细胞上清中,TNF-α的表达量均大幅上调;过表达TSP50的细胞上清和TNF-α均可促进巨噬细胞中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6以及抗炎因子IL-10的表达,并促进巨噬细胞的吞噬作用;在过表达TSP50的细胞中干涉TNF-α,其上清对巨噬细胞的吞噬功能和细胞因子分泌功能的诱导能力下降。进一步研究结果显示,过表达TSP50的细胞上清和TNF-α均可以促进IKKα的磷酸化以及p65的入核;阻断NF-κB信号可以明显抑制TSP50上清对巨噬细胞吞噬功能和细胞因子分泌功能的促进作用。另外,过表达TSP50的细胞上清和TNF-α均可促进M2b型巨噬细胞标志物CCL-1的表达。结论:过表达TSP50的细胞可以通过分泌TNF-α,激活巨噬细胞内的NF-κB信号,并最终诱导微环境中的巨噬细胞分化为M2b型巨噬细胞。