大熊猫秦岭亚种IL-2基因克隆及表达研究

来源 :2010大熊猫繁育技术委员会年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liangmin888
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目的:明确大熊猫四川种群和秦岭种群的IL-2在基因水平是否存在差异;获得具有生物活性的秦岭大熊猫IL-2原核表达产物.方法:采用RT-PCR方法从ConA诱导培养的秦岭大熊猫外周血淋巴细胞中扩增IL-2基因,利用DNA重组技术构建原核重组表达载体pET32a-IL-2,在E coli BL21(DE3)中利用IPTG诱导表达IL-2融合蛋白.融合蛋白利用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并进行可溶性分析和纯化.纯化的融合蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体;采用淋巴细胞增殖试验测定融合蛋白生物活性.结果:秦岭与四川大熊猫核苷酸相似性为99.4%.重组的IL-2融合蛋白的蛋白相对分子质量(Mr)为34 000;纯化融合蛋白免疫家兔获得了抗IL-2的多克隆抗体,该抗体能够检测到大熊猫淋巴细胞分泌的IL-2.
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