【摘 要】
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目的：阐明高温α-淀粉酶热稳定性不依赖Ca2+的机制,由此可以通过酶的理性设计对目前Ca2+依赖的高温酸性α-淀粉酶进行分子改造,从而获得适合工业应用、热稳定性不依赖Ca2+
【机 构】
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江苏省海洋资源开发研究院,连云港市222005
【出 处】
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全国第二届海洋与陆地多糖多肽及天然创新药物研发学术会议
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目的：阐明高温α-淀粉酶热稳定性不依赖Ca2+的机制,由此可以通过酶的理性设计对目前Ca2+依赖的高温酸性α-淀粉酶进行分子改造,从而获得适合工业应用、热稳定性不依赖Ca2+的高温酸性α-淀粉酶.方法：将来自深海热液口的一株超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ21的Ca2+不依赖型高温α-淀粉酶与来自超嗜热古菌Pyrococcus woesei的Ca2+依赖型高温淀粉酶比较,通过三维建模判定可能与Ca2+结合位点有关的氨基酸第175、176位,之后进行定点突变A175C、D176C,经原核表达,亲和层析、凝胶过滤层析纯化得到突变酶,与野生型进行酶学性质分析比较及Ca2+依赖性检测.结果：突变酶在82.5℃、2h无Ca2+条件下热稳定性为野生型的69％.结论：这一突变体在以上条件下可能依赖Ca2+维持其热稳定性.
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