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背景人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)于2005年发现,至2010年已发现四个基因型别(HBoV 1-4)。本研究通过大样本的回顾性研究辅以系统的前瞻性研究,以了解不同基因型别的HBoV在北京地区儿童中的流行状况,系统全面地了解不同基因型别HBoV的致病性及病原学意义。方法收集首都儿科研究所附属儿童医院2006年1月~201 3年12月急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物(Nasopharyngeal aspirates,NPA)或咽拭子(Throat swabs,TS)标本4941份、2010年10月~~2013年12月急性腹泻患儿的粪便标本1121份、2006年3月~~2013年12月中枢神经系统感染患儿脑脊液标本2239份、2006年1月~~2013年12月血液系统感染患儿血液标本2619份,应用针对NS1基因的可同时检测HBoV 1-4基因型别的PCR方法进行HBoV1-4筛查,阳性扩增产物通过基因序列测定确定基因型别;阳性标本再利用针对NP1基因与VP1基因重合区域的引物进行PCR扩增,扩增产物进行序列测定,所测得的序列应用MEGA6软件进行基因进化分析,并建立进化树,应用SimPlot软件对全基因组序列进行重组分析。结果急性呼吸道感染患儿呼吸道标本中仅检测到HBoV1,阳性率为1.65%(82/4941),与其他病毒的共感染率为44.89%(22/49),男童与女童阳性检出率(1.9%:1.31%)无差异,主要在小于2岁的患儿呼吸道标本中检测到;腹泻患儿粪便标本中检测到HBoVs阳性率为2.2%(25/1121),其中HBoV1阳性率为0.80%(9/1121)、HBoV2为1.33%(15/1121)、HBoV3为0.08%(1/1121),HBoVs阳性患儿均小于2岁;中枢神经系统脑脊液标本中检测到HBoVs阳性率为0.80%(18/2239),其中HBoV1阳性1例,HBoV2阳性17例;血液标本中HBoVs阳性率为0.20%(6/2619),且均为HBoV2,在儿童中的年龄分布特征不明显。各类型标本中HBoVs均无明显季节分布。用BLAST及BioEdit进行序列比对,MEGA 6.0建立进化树。HBoV NP1/VP1基因序列进化分析发现HBoV1同源性较高(97.1%~100%的相似性),在连续八年的呼吸道标本、两年的粪便标本及八年的脑脊液标本中序列均很保守;但粪便、脑脊液及血液标本中扩增得到的HBoV2基因序列存在一定的变异性,变异最高达到7.7%,且本研究检测到的HBoV2序列与GenBank中其他国家和地区来源的HBoV2序列在不同的分支;Simplot重组分析发现,本研究所得的HBoV2为HBoV2A和HBoV2B的重组体,且形成一新的分支。结论在急性呼吸道感染的呼吸道标本较常检测到HBoV1,在急性腹泻及神经系统感染、血液系统感染患儿的粪便、脑脊液、血液标本中较常检测到HBoV2;进化分析表明HBoV1序列高度保守,但HBoV2序列变异较大,而在中国流行的大部分HBoV2为HBoV2A与HBoV2B重组体,且单独形成一簇。