【摘 要】
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磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)作为芳香族氨基酸合成的前体物质,其供应量直接影响L-苯丙氨酸的生物合成.大肠杆菌中PEP羧化酶(由ppc基因编码)将PEP转化为草酰乙酸进而进入三羧酸
【机 构】
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北京化工大学生命科学与技术学院,北京市朝阳区北三环东路15号 100029
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磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)作为芳香族氨基酸合成的前体物质,其供应量直接影响L-苯丙氨酸的生物合成.大肠杆菌中PEP羧化酶(由ppc基因编码)将PEP转化为草酰乙酸进而进入三羧酸循环(TCA).为了降低PEP在上述途径的消耗,本研究采用RED同源重组技术构建ppc基因缺陷菌株,切断PEP生成草酰乙酸的代谢途径.通过补加TCA中间代谢物弥补草酰乙酸回补途径缺失对菌体生长的影响.摇瓶发酵结果表明,补加适宜浓度的L-谷氨酸可以维持菌体正常生长,与非敲除对照菌株(ppc+)发酵结果对比,L-苯丙氨酸产量提高0.77倍,且葡萄糖转化率是ppc+菌株的2.37倍.Ppc敲除菌株的构建对于提高L-苯丙氨酸发酵产率及葡萄糖利用率具有一定的指导意义.
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