【摘 要】
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PiggyBac转座子最初从粉纹夜蛾Trichoplusia ni基因组中分离得到,是一种非病毒载体,具有承载大片段外源基因,低毒以及长效表达等优点.在过去的几十年中,piggyBac转座子已
【机 构】
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浙江大学动物科学学院,杭州,310058
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PiggyBac转座子最初从粉纹夜蛾Trichoplusia ni基因组中分离得到,是一种非病毒载体,具有承载大片段外源基因,低毒以及长效表达等优点.在过去的几十年中,piggyBac转座子已成功应用在大量的脊椎动物和非脊椎动物,是一个广谱的、强大的遗传操作工具,可以制备转基因动物,用于人类基因治疗和诱导多能干细胞.但是,piggyBac转座子介导的转基因效率还是较低,以家蚕转基因实验结果为例,所有已发表的研究论文平均转基因效率仅为8.8％.针对这个问题,本研究发明创建了一种有效提高转基因效率的新方法,其核心是构建一个类转录激活因子效应蛋白(transcription activator-like effector,TALE)和piggyBac转座酶(PBase)的融合蛋白(TALE-PBase)用于介导piggyBac转座子的转座.实验结果证明采用TALE-PBase融合蛋白可以显著地将转座效率提高到63.9％,相当于是目前转座效率平均水平的7倍.而且新方法的转基因阳性蛾区中的阳性个体数每区平均达到了18.1条,比目前家蚕转基因实验的平均水平最大提高了5.7倍.TALE-PBase融合蛋白介导的转基因技术不仅提高了转基因阳性蛾区数,而且也明显提高了阳性蛾区中的阳性个体数.这是piggyBac转座子介导的转基因技术的巨大突破,为今后的转基因研究提供了很好的技术支撑.
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