【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种由PRRS病毒(PRRSV)引起的危害世界养猪业的重要传染病,目前尚无有效的防治措施.NB6是PR
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种由PRRS病毒(PRRSV)引起的危害世界养猪业的重要传染病,目前尚无有效的防治措施.NB6是PRRSV非结构蛋白Nsp9的特异性纳米抗体,可以抑制病毒的增殖.TAT是目前研究较为深入的细胞穿膜肽之一.本研究目的 是利用TAT携带NB6进入细胞,并检测其病毒抑制作用,以期开发出一种治疗PRRS的新型药物.本实验表达并纯化了NB6、TAT-NB6蛋白,不同浓度(1μM-5μM)的两种蛋白分别作用于Marc-145细胞0.5h-3h,IFA和western blot检测穿膜效果.实验结果显示：NB6不能进入细胞,而TAT-NB6可以进入细胞,并且呈现时间、剂量依赖性.为了研究TAT-NB6蛋白的抗病毒作用,0.01 MOI PRRSV接种Marc-145细胞,感染1h后弃上清,加入5μM TAT-NB6作用24h和36h后收集细胞.Western blot检测结果显示-24h时,细胞中能检到TAT-NB6,此时病毒的增殖明显被抑制；36h时,细胞中未检到TAT-NB6,而此时的病毒增殖不再被抑制.综上所述,我们初步证明了TAT-NB6蛋白能够进入Marc-145细胞,并且可以抑制PRRSV在细胞内的增殖.
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