【摘 要】
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目的：AKT信号蛋白与肌肉蛋白质合成有非常密切的关系.本研究以跑台作为运动负荷方式,研究不同强度运动对AKT信号分子的作用,以明确运动强度与AKT之间的关系.方法：雄性、SPF级、8周龄SD大鼠,体重180～200g.随机分为4组：对照组(10只)、小强度运动组(6只)、中强度运动组(6只),大强度运动组(6只),每笼6只,环境温度23±2℃,相对湿度65±5％,光照12小时/天(光照时间为07：
【机 构】
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首都体育学院,北京100088 北京体育大学,北京100084
【出 处】
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2010年中国运动生理生化学术会议
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目的：AKT信号蛋白与肌肉蛋白质合成有非常密切的关系.本研究以跑台作为运动负荷方式,研究不同强度运动对AKT信号分子的作用,以明确运动强度与AKT之间的关系.方法：雄性、SPF级、8周龄SD大鼠,体重180～200g.随机分为4组：对照组(10只)、小强度运动组(6只)、中强度运动组(6只),大强度运动组(6只),每笼6只,环境温度23±2℃,相对湿度65±5％,光照12小时/天(光照时间为07：00-19：00h).自由取食及饮水,每日换水,3天换一次垫料,以保持清洁干燥.实验前所有动物均未进行过跑台运动.正式训练前,动物在跑台(天津产)上进行4天的适应性训练,休息3天.小强度组跑度为10m/min,中强度运动组跑速18rn/min,大强度运动组跑速26m/min,三种跑速的坡度10％,持续时间均为60min,共训练6天.各运动组动物分别在运动后1h,腹腔注射20％氨基甲酸乙酯麻醉.在无任何反射反应后,迅速取出左侧完整腓肠肌,去除筋膜和脂肪等,保留约150mg白腓肠肌(位于腓肠肌外侧浅层)2块,装入冻存管后立即投入液氮速冻,放于-80℃冻存.AKT抗体和AKTSer473磷酸化抗体购自Cell Signal公司.β-actin抗体,Santa Cruze公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔IgG抗体,中杉金桥生物技术公司.提取腓肠肌蛋白,采用BCA测试方法测定总蛋白含量,免疫印记法(Western Blot)测定目的蛋白含量.使用SuperECL Plus超敏发光液进行化学发光显色,显影后的X光胶片,用Pharmacina凝胶成像系统(Pharmacina公司)拍照,用分析软件(TotalLabs v1.1,Pharmacina公司)光密度扫描分析,去除本底,计算目的条带光密度值.每个条带与相应样品的β-actin条带光密度值对比,计算出目的蛋白的相对含量.以对照组目的蛋白的相对含量为1,实验组样品的目的蛋白相对含量与对照组目的蛋白的相对含量进行比较,计算出与对照的相差倍数.实验数据统计处理应用SPSS软件,计量资料用均数±标准差((-x)±SD)表示,均数比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),对观测点的组间多重比较(Post Hoc)采用LSD (Least Significant Difference,最小显著性差异)方法分析.以p＜0.05表示具有显著性差异,p＜0.01表示具有非常显著性差异.结果：不同强度运动后各观测点AKTSer473磷酸化变化：小强度运动后AKTSer473磷酸化水平与安静状态水平没有显著性差异(p＞0.05),中等强度运动后AKTSer473磷酸化水平分别比安静状态提高57％ (p＜0.01),大强度运动后,AKTSer473磷酸化水平分别比安静状态提高90％ (p＜0.01).不同强度运动后各观测点AKT蛋白表达量变化：小强度运动后各个观测点Akt蛋白表达量与安静状态水平没有显著性差异(p＞0.05),中等强度运动后,Akt蛋白表达量比安静状态提高了30％ (p＜0.05),大强度运动后1h,Akt蛋白表达量比安静状态提高了26％ (p＜0.05).结论：AKT蛋白含量和AKTSer473磷酸化变化对运动强度呈现依赖性.
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