建兰遗传转化体系之筛选体系的建立

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本研究以转化建兰根状茎为材料,探究了各种浓度梯度的潮霉素对植物材料的影响,寻求最适筛选浓度。分别利用固体和液体两种培养方式对转化材料的筛选体系进行了探究。主要结果如下:固体培养基以0mg/l、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L、40mg/L建立潮霉素(hyg)浓度梯度和液体培养基以0mg/l、10mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L、40 mg/L、50mg/L建立潮霉素(hyg)浓度的梯度。结果发现不同的培养方式筛选效果不同,滤纸桥法褐化外植体死亡速度比固体法快近两倍,为保证筛选的真实有效,最终确定固体培养法40mg/L为筛选终浓度,时间需要30d左右。在上述的基础上,同时对羧卞青霉素(Carb)不同浓度的抑菌效果和对植物材料生长的影响也进行了探究。最后得出抑菌剂羧卞青霉素浓度为100mg/L时,可有效抑制农杆菌生长,同时不影响愈伤组织的出愈和生长。
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