【摘 要】
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目的 本研究旨在分析Eg-TSP1基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中发挥的作用,为包虫病的防控提供基础参考资料.方法 对Eg-TSP1基因进行生物性息学分析,通过克隆和原核表达获得重组Eg-TSP1蛋白；以蛋白质免疫印迹分析其反应原性；将重组蛋白免疫小鼠后测定小鼠抗体和细胞因子水平,分析其免疫原性；采用免疫荧光定位以及原头蚴体外RNA干扰的方法分别对该蛋
【机 构】
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四川农业大学动物医学院动物寄生虫病研究中心 成都 611130 四川农业大学理学院 成都 6111
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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目的 本研究旨在分析Eg-TSP1基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)生长发育中发挥的作用,为包虫病的防控提供基础参考资料.方法 对Eg-TSP1基因进行生物性息学分析,通过克隆和原核表达获得重组Eg-TSP1蛋白；以蛋白质免疫印迹分析其反应原性；将重组蛋白免疫小鼠后测定小鼠抗体和细胞因子水平,分析其免疫原性；采用免疫荧光定位以及原头蚴体外RNA干扰的方法分别对该蛋白在虫体上的分布及基本作用进行分析.结果 生物信息学分析发现,该蛋白与尿路上皮蛋白Ⅰ(Uroplakin Ⅰ)同源,通过分子克隆和原核表达方法得到重组Eg-TSP1蛋白,以包虫病小鼠阳性血清对该蛋白进行免疫印迹分析,能够有效的识别该蛋白.将重组Eg-TSP1蛋白对小鼠进行免疫,诱导小鼠产生了大量特异性IgG,且IgG2a呈显著上升趋势,提示诱导产生了Th1型免疫保护反应；通过进一步的细胞因子表达检测,发现重组Eg-TSP1蛋白能够引起小鼠的IFN-γ、IL-12以及IL-10水平显著上升,显示该蛋白具有良好的免疫原性.免疫荧光定位结果显示,该蛋白主要定位于成虫和原头蚴的表皮层以及原头蚴吻突部.最后为了探讨Eg-TSP1基因在原头蚴的生长发育中所起到的作用,我们对原头蚴进行了体外的RNA干扰研究.以特异性的siRNA经浸泡法转染原头蚴后,使靶基因的mRNA表达量下降了64.3％,通过透射电镜观察发现,干扰组原头蚴的虫体皮肤明显比对照组的更薄、更疏松.结论 Eg-TSP1具有良好的免疫原性,并且可能与细粒棘球蚴的皮肤生成、成熟或稳定性有关,是一个潜在的包虫病候选疫苗分子.
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