【摘 要】
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目的：人工合成N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylated Homoserine Lactones,AHLs)全抗原并制备相应单克隆抗体,为N-AHLs免疫检测新方法的建立及海洋弧菌N-AHLs动态监测奠定基础.
【机 构】
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海军总医院中心实验科,北京,100048海军总医院中心实验科,北京,100048;青岛大学医学院,青岛,266021海军总医院科研科,北京,100048
【出 处】
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中国生物工程学会第十届学术年会暨2016年全国生物技术大会
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目的：人工合成N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylated Homoserine Lactones,AHLs)全抗原并制备相应单克隆抗体,为N-AHLs免疫检测新方法的建立及海洋弧菌N-AHLs动态监测奠定基础.
方法：人工合成N-十二酰高丝氨酸内酯(N-lauroyl-homoserine lactone,N-C12-HSL)及其半抗原衍生物(含羧基活性交联基团)的主要原料为十二烷酸和高丝氨酸内酯,通过多步系列化学反应完成,用1H-核磁共振(1H-Nuclear magnetic resonance,1H-NMR)、高压/效液相色谱仪(High pressure/performance liquid chromatography,HPLC)和液相色谱-质谱联用(Liquid chromatography-mass spectroscopy,LC-MS)方法确证合成产物的结构,并用生物感应法检测合成N-AHLs的天然生物活性;用N-羟基琥珀酰亚胺活泼酯法将12-羧基-N-十二酰高丝氨酸内酯半抗原衍生物连接到载体蛋白;将N-C12-HSL人工全抗原通过传统单抗制备技术,获得抗N-AHLs杂交瘤细胞株,用ELISA法鉴定其特异性和效价.
结果：质谱与核磁共振氢谱分析结果与理论预测相同,表明成功合成目标产物N-C12-HSL和12-羧基-N-十二酰高丝氨酸内酯半抗原衍生物;所合成的N-AHLs能够分别激活生物感应菌株E.coli MG4(pKDT17)和CV026并使之显色;紫外吸收光谱扫描结果显示半抗原已分别与牛血清白蛋白(Bovine serum Albumin,BSA)和鸡卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)发生偶联,成功制备其全抗原;共获得3株抗N-十二酰高丝氨酸内酯单抗,均具有良好的免疫反应性.
结论：成功合成了具备天然生物活性的N-AHLs分子,并成功制备其全抗原和相应的单克隆抗体,为N-AHLs动态监测和后续研究奠定了基础.
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