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目的 对中国临床诊断为白质消融性白质脑病(VWM)的患儿进行真核细胞翻译启动因子2Bα-ε (eIF2Bα-ε)的相应编码基因EIF2B1-5突变分析,对17例确诊患儿进行自然病程的随访研究,以期对中国VWM患儿神经系统功能的进展速度等临床表型特点和突变谱有全面的了解,并探讨基因型-表型关系.该病突出特点为发热等应激状态导致病情明显加重甚至死亡,由此研究内质网(ER)应激在VWM发病中的作用.方法 (1)对临床及基因突变检测诊断的17例早期儿童型VWM患儿,进行临床随访.根据运动进展速度进行分级,进行基因型-表型分析；(2)利用VWM患者皮肤成纤维细胞,给予ER应激诱导,于诱导后不同时相用Western blot和免疫细胞化学方法检测非折叠蛋白(UPR)通路的分子指标,并用电子显微镜观察细胞凋亡和自噬,Illumina RNA表达谱芯片进行差异基因检测和初步生物信息学分析,并与对照皮肤成纤维细胞进行比较.结果 (1)临床特点：17例中男12例,女5例.多数(13/17)起病前发育正常.起病年龄平均2.7岁(0.4～6.4岁),急性起病或亚急性起病,均以运动障碍起病.至末次随访,平均病程4.3年(0.3～8.7年),均呈进行性加重,3例死亡.64％(11/17)病程中伴发作性加重.运动功能进展速度明显高于国外报道病例,病程4.5年后所有患儿均丧失行走能力,最早丧失行走能力的年龄为起病后0.42年,起病年龄越小,丧失行走能力的年龄越早；认知功能进展缓慢；6例(35％)伴有惊厥.(2)基因突变分析：共发现了EIF2B2-5的22种突变,其中包括15种新突变.EIF2B3突变率显著高于国外报道,我们还发现了一个eIF2Bγ (EIF2B3编码)的热点突变p.I346T,35％中国患者带有该突变.(3)基因型-表型关系：重型患者中eIF2Bα突变者多于eIF2Bε突变者；相同基因型(eIF2Bγ∶ I346T)患者表型存在明显差异.(4)ER应激：①37℃培养条件下,基础状态下,UPR通路相关蛋白eIF2α磷酸化和ATF4水平在2例突变为eIF2Bγ∶ I346T/I346T和G47E/I346T患者皮肤成纤维细胞中表达量较正常人对照组明显增高.给予TG刺激后,突变细胞中eIF2α磷酸化和ATF4水平在TG刺激2h时升高最明显,且高水平表达持续至刺激8h,较对照组表达量更大,更持久.对照组细胞eIF2α磷酸化和ATF4水平在TG刺激4h时升高最明显,8h时明显降低.基础状态下,P-eIF2Bε在突变细胞和对照组细胞中均有表达,且突变细胞较对照组表达量高,纯合突变细胞较杂合突变细胞中水平高.随着TG刺激时间的延长其活性条带在突变细胞中较对照组表达量升高明显.②35℃培养条件下,未给予TG刺激时,携带Bγ∶ G47E/I346T、Bγ∶I346T/I346T突变的细胞与正常对照组中eIF2α磷酸化、ATF4及P-eIF2Bε水平均较37℃培养条件下高.给予细胞TG刺激,携带突变的细胞中eIF2α磷酸化和ATF4水平随着刺激时间的变化趋势与37℃时未见明显差异.③电镜显示Bγ∶ G47E/I346T突变患者皮肤成纤维细胞在基础状态下即存在大量自噬小体,ER应激诱导后8h,细胞发生凋亡,且自噬小体进一步增加.④利用Illumina RNA表达谱芯片发现ER应激前后Bγ∶ G47E/I346T突变患者与正常人对照组皮肤成纤维细胞比较有34种差异表达的通路蛋白基因,结果需进一步验证.结论 通过随访研究对中国早期儿童型VWM患者的主要神经系统表型的进展过程有了较详尽的了解.目前尚缺乏明确的基因型-表型相关性.中国患者基因突变谱与国外报道存在很大差异.内质网应激导致凋亡和自噬的发生可能在VWM的发病机制中扮演重要角色,低温对抵抗VWM突变细胞内质网应激的作用不明显.