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目的:通过细胞实验,揭示钙信号转导在TOCP影响细胞自噬中的作用及机制。方法:采用人成神经瘤细胞SK-N-SH和小鼠成神经瘤细胞N2a为模型,不同浓度的TOCP染毒细胞48h/24h,Western Blot检测自噬相关蛋白LC3 II/I和P62蛋白表达;采用细胞磷脂酶C(PLC)抑制剂U73122预处理细胞30min后染毒0.75mM/75μM TOCP 48h/24h,ELISA法检测PLC的活性、IP3水平,Western Blot检测IP3R蛋白、LC3 II/I比值和P62表达水平;IP3R抑制剂Xestospongia B和Ry R抑制剂Ryanodine预处理细胞30min后染毒0.75mM/75μM TOCP 48h/24h,荧光分光光度计检测细胞内游离钙离子浓度,Western Blot检测IP3R蛋白和LC3 II/I比值;TOCP染毒细胞48h/24h,免疫共沉淀观察IP3R和Beclin1的相互作用。结果:(1)SK细胞:不同浓度TOCP处理后结果显示LC3 II/I比值明显升高(P<0.001),P62表达也明显升高(P<0.05);N2a细胞:不同浓度TOCP处理后结果显示LC3 II/I比值明显升高(P<0.01),P62表达同样明显升高(P<0.05)。(2)SK细胞:与对照组比较,TOCP处理后细胞内PLC活性增高、IP3表达水平下降(P<0.05);与PLC抑制剂联合处理后,相对于TOCP处理组,PLC活性有所降低,IP3表达水平有所上升(P<0.05)。Western Blot结果显示:与对照组比较,TOCP处理后IP3R蛋白表达、P62蛋白表达以及LC3 II/I比值均有所上升(P<0.01);在与PLC抑制剂联合处理后,IP3R蛋白表达、P62蛋白表达以及LC3 II/I比值相对于TOCP处理组均有所下降(P<0.05);N2a细胞:PLC活性及IP3表达水平变化与SK一致。Western Blot结果显示:与对照组比较,TOCP处理后LC3 II/I比值均有所上升(P<0.01);在与PLC抑制剂联合处理后,LC3 II/I比值相对于TOCP处理组均有所下降(P<0.05)。(3)SK细胞:与对照组相比,TOCP处理后细胞内游离钙离子浓度升高,在与IP3R抑制剂及Ry R抑制剂联合处理后,相对于TOCP处理组,细胞内游离钙离子浓度有所下降。Western Blot结果显示:与对照组比较,TOCP处理后IP3R蛋白表达以及LC3 II/I比值均有所上升(P<0.001);在与PLC抑制剂联合处理后,IP3R蛋白表达以及LC3 II/I比值相对于TOCP处理组均有所下降(P<0.05);N2a细胞:结果与SK细胞一致。(4)SK细胞:与对照组相比,TOCP处理后IP3R与Beclin 1蛋白间相互作用减弱(P<0.01);N2a细胞:结果与SK细胞一致。结论:TOCP能引起SK及N2a细胞自噬体累积,抑制自噬流;TOCP可以通过激活PLC途径从而导致IP3R通道开放引起自噬现象;TOCP可以通过激活内质网钙离子通道导致钙信号紊乱诱发自噬累积并且抑制自噬流;TOCP引起的自噬现象很有可能与其抑制了IP3R与Beclin 1蛋白间的相互作用有关。