牙髓干细胞在力学加载下表达肌腱相关基因并可在体内构建工程化肌腱样组织

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目的:牙髓干细胞(DPSCs)具有自我更新和多向分化能力,适合作为组织工程中的种子细胞。本研究探索DPSCs构建工程化肌腱组织的可能性。方法:有限稀释克隆方法分离培养人DPSCs,流式细胞术和细胞免疫荧光检测干细胞表型CD146、Stro-1;细胞多向分化诱导。DPSCs接种于聚乙醇酸PGA支架材料在有或无静态张力下体外培养,体外培养1周后扫描电镜检测细胞在PGA上生长情况;DPSCs—PGA支架在体外培养2周后回植到裸鼠背部。8周、14周后形成的组织取材研究,透射电镜检测形成胶原直径、密度;偏振光显微镜检测形成胶原结构、成熟水平以及PGA降解情况;石蜡切片Masson、HE染色观察胶原形态以及运用免疫组化检测Col-I、Col-VI、SCX、TNMD,TNC和EYA2。结果:DPSCs呈典型的成纤维样细胞形态,原代细胞呈克隆集落样生长,表达间充质干细胞标志物CD146、Stro-1,在体外具有分向分化能力,具有典型的干细胞特性。经RT-PCR检测发现DPSCs高表达Eya2、TNC、Col-I、Col-III、Six1基因,低表达SCX、Six2等肌腱相关基因。裸鼠体内构建的DPSCs-PGA工程化肌腱样组织,8周、14周后经取材大体标本观察、组织学检测及透射电镜胶原超微结构观察发现体内有张力组形成的肌腱样组织优于无张力组,形成更多胶原纤维,胶原纤维直径也更粗大,并且有Col-I、Col-VI、SCX、Eya2、TNC和TNMD肌腱相关蛋白的表达。结论:本研究表明了DPSCs可能是肌腱组织工程一种潜在的干细胞来源。
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