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目的 高糖可以促进细胞衰老,而自噬参与了高糖导致的肾损害.本实验探讨雷帕霉素及自噬抑制剂(3-MA)对高糖诱导的原代大鼠系膜细胞自噬、氧化损伤及衰老的影响.方法 分离大鼠原代系膜细胞(GMCs),分为正常对照组、高糖组、高糖+雷帕霉素(自噬增强剂)干预组及高糖+3-甲基腺嘌呤(自噬抑制剂)干预组.在细胞培养24 h、72 h及10 d时,用Western blot观测自噬体形成标志物-自噬相关基因LC3及自噬体降解标志物泛素结合蛋白p62/SQSTMI的表达变化；用硫代巴比妥酸法检测细胞脂质损伤产物-丙二醛(MDA)的水平,用2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法测定细胞蛋白质损伤产物-羰基含量,通过衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色及衰老相关异染色质斑块(SAHF)分析检测细胞的衰老程度.结果 LC3-I和LC3-II是自噬的标志物,其表达水平的高低代表了自噬活性的强弱.p62/SQSTM1是一种泛素结合蛋白,可以与LC3相互作用,其表达增加表明自噬活性下降.细胞中丙二醛(MDA)和蛋白羰基含量反映了细胞中脂质和蛋白质分子氧化损伤的程度.与对照组相比,高糖处理24h后,自噬标志物LC3和p62/SQSTMI、MDA和蛋白糖基的表达水平,SA-β-gal染色阳性率及SAHF 形成分析无统计学差异；在72h和10d,LC3表达降低,p62/SQSTMI表达升高(P＜0.05)；在72h,高糖组细胞SA-β-gal染色阳性率明显增加(P＜0.05)且高糖处理后细胞核形成明显的异染色质斑块.高糖培养的细胞用雷帕霉素干预24h后,各检测指标表达变化无统计学意义,干预72 h和10 d后LC3表达升高,p62/SQSTMI表达下降、MDA及蛋白质羰基含量均下降(均P＜0.05),72 h后细胞SA-β-gal染色阳性率下降(P＜0.05),细胞核异染色质斑块形成减少；高糖培养的细胞用3-甲基腺嘌呤干预24h后,各检测指标表达变化无统计学意义,干预72 h和10 d后,LC3表达下降,p62/SQSTMI表达升高、MDA及蛋白质羰基含量升高(均P＜0.05),72 h后细胞SA-β-gal染色阳性率上升(P＜0.05),细胞核斑块形成增多.结论 高糖可抑制系膜细胞自噬功能,促进系膜细胞氧化损伤,加速细胞衰老；雷帕霉素干预可减轻高糖对系膜细胞自噬功能抑制,减少氧化损伤,延缓衰老；3-甲基腺嘌呤加重高糖对系膜细胞自噬功能的抑制,进一步加重细胞氧化损伤,加速系膜细胞衰老.