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目的:通过一个半制备规模的高效疏水相互作用色谱(HPHIC)饼,对E coli表达重组人硫氧还蛋白-Flt3配体(rhTrx-FL)融合蛋白进行复性与纯化。
方法:采用固定相为苯基键合在硅胶基质上的填料,分别考察了色谱过程中,流速和进样量对rh Trx-FL复性效率的影响。
结果:溶解于8mol/L脲中得到变性的抽提液,在半制备色谱饼上复性与纯化rh Trx-FL包涵体的质量回收率可达67.0%,纯度为92.1%,对G-CSF依赖株NFS-60的细胞增殖作用的活性结果表明,当与G-CSF协同作用时,平均比活为8.51×108 IU/mg。
结论:本实验建立的rhTrx-FL复性与纯化的HPHIC法制备工艺简便,硫氧还蛋白融合蛋白的得率较高,对融合的外源蛋白的性质没有任何影响,适于对重组外源蛋白的大规模生产。