HBx基因缺失突变对乙型肝炎病毒复制和转录的影响

来源 :第八届全国肝脏疾病临床学术大会暨第四届中国-印度尼西亚肝病峰会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liteary
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  目的:构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法:以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0X7,并酶切和DNA测序鉴定。用SapI单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PoLyJetTM Reagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中。在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southernblots和real-time PCR同时检测胞质DNA复制和胞核cccDNA的合成,real-time PCR定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录。结果:在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Westem blot的检测范围。两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P>0.05)。而在转染后96h HBx突变组中胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50%~70% (P<0.05)。结论:HBx缺失虽然不影响胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录。
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